IL-6对apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展及ABCA1/G1表达的影响

摘要

[目的]
　　IL-6是一种多效性的细胞因子,与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。为了验证在慢性炎症过程中,IL-6对动脉粥样硬化发生发展的影响,本研究拟在干酪素诱导的慢性炎症模型中,观察 IL-6受体阻断剂tocilizumab对apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠ABCA1和ABCG1表达及动脉粥样硬化形成的影响,并对其机制进行探讨,以便明确IL-6在防治动脉粥样硬化中的作用。
　　[方法]
　　48只8周龄雄性apoE-/-小鼠随机分为四组,每组12只。所有小鼠都给予高脂高胆固醇饲料(15％猪油+0.25%胆固醇)饲养。基础组每天皮下注射0.5 ml蒸馏水,饲养至第14周处死;Tocilizumab处理组每天皮下注射0.5 ml蒸馏水,自第9周开始每周给予Tocilizumab(8mg/kg)腹腔注射一次。炎症组每天皮下注射0.5 ml干酪素饲养至第14周处死;Tocilizumab治疗组每天皮下注射0.5 ml干酪素,自第9周开始每周给予Tocilizumab(8mg/kg)腹腔注射一次。采用酶联免疫法检测apoE-/-小鼠血浆C反应蛋白、TNFα、IL-1β和IL-10水平;氧化酶法测定 apoE-/-小鼠血浆甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量;免疫比浊法检测血浆载脂蛋白A-I和apoB含量;实时定量PCR检测apoE-/-小鼠主动脉、肝脏及小肠ABCA1和ABCG1基因表达;Western印迹法检测apoE-/-小鼠主动脉、肝脏及小肠ABCA1和ABCG1蛋白质表达;冰冻切片油红O染色检测apoE-/-小鼠主动脉根部横切面动脉粥样硬化斑块面积。
　　[结果]
　　酶联免疫法结果显示IL-6受体阻滞剂Tocilizumab显著降低apoE-/-小鼠血浆C反应蛋白、TNFα和IL-1β水平,提高IL-10水平;血脂检测发现tocilizumab处理组apoE-/-小鼠血浆中的HDL–C、和apoA-I水平升高,而TG、TC水平降低;实时定量PCR结果显示tocilizumab增加apoE-/-小鼠主动脉、肝脏及小肠ABCA1和ABCG1基因表达;Western印迹法结果提示tocilizumab增加apoE-/-小鼠主动脉、肝脏及小肠ABCA1蛋白质的表达。油红O染色结果显示tocilizumab减轻主动脉根部横截面的动脉粥样硬化病变。
　　[结论]
　　IL-6受体阻滞剂tocilizumab能够抑制apoE-/-小鼠体内炎症因子CRP、TNFα和IL-1β的表达,增加主动脉、肝脏及小肠ABCA1和ABCG1基因和蛋白质的表达,减轻慢性炎症对主动脉粥样硬化病变的影响。

目录

封面

声明

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中文摘要

英文摘要

前言

实 验 材 料

一、实验动物及饲料

二、主要试剂与配制

三、主要仪器与器材

实 验 方 法

一、炎症动物模型的制作及处理

二、血浆细胞因子检测

三、全自动生化分析仪测定血清中脂质含量

四、实时定量PCR

五、组织蛋白抽提

六、蛋白印迹

七、油红O染色

八、统计学分析

实 验 结 果

一、Tocilizumab对ApoE-/-小鼠血浆炎症因子的影响

二、Tocilizumab对apoE-/-小鼠血脂含量的影响

三、Tocilizumab对apoE-/-小鼠主动脉、肝脏及小肠组织ABCA1和ABCG1基因表达的影响

四、Tocilizumab对apoE-/-小鼠主动脉、肝脏及小肠组织ABCA1和ABCG1蛋白质表达的影响

五、Tocilizumab对ApoE-/-小鼠主动脉根部横切面动脉粥样硬化病变面积的影响

讨论

结论

参考文献

附录

文 献 综 述

硕士期间发表的论文

致谢