白杨素对TRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的影响

摘要

研究目的:
　　白杨素(chrysin, ChR)是否通过上调死亡受体5(Death receptor5, DR5)增敏肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。
　　方法:
　　体外培养人肝癌Bel-7402细胞。采用MTT法测定细胞活性。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析细胞凋亡率。DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用。Western Blotting检测细胞DR5蛋白的表达。
　　结果:
　　MTT比色法测定结果表明,单用 ChR或 TRAIL处理48小时对人肝癌Bel-7402细胞增殖活性抑制作用的半数抑制浓度(IC50值)分别为252μmol/L和664 ng/mL,然而,用40μmol/L ChR预孵育30分钟后,再加入TRAIL处理48小时, IC50值为91 ng/mL,合并用药效应的CI值是0.497。 PI染色FCM分析表明,单用40μmol/L ChR或100 ng/mL TRAIL作用48小时,细胞凋亡率(亚二倍体DNA含量细胞百分率)分别为4.92％±0.38%和6.32%±0.39%,但是,用40μmol/L ChR预孵育30分钟后,再加入100 ng/mL的TRAIL处理48小时,细胞凋亡率为31.3%±2.50%;DR5/Fc(1μg/mL)能够使亚毒性浓度的ChR与TRAIL合用的人肝癌 Bel-7402细胞凋亡率从32.4%±0.47%下降到15.2%±0.38%(P<0.05)。DNA琼脂糖凝胶电泳显示,40μmol/L ChR预孵育30分钟后,再加入100 ng/mL的TRAIL处理48小时,在人肝癌Bel-7402细胞,展示出典型DNA梯形条带图谱。Western Blot分析结果发现, ChR以浓度和时间依赖的方式上调Bel-7402细胞DR5表达;DR5嵌合蛋白能够有效对ChR上调Bel-7402细胞DR5表达。
　　结论:
　　1.亚毒性浓度的ChR具有增强TRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。
　　2. ChR敏化TRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用的机制与其上调 DR5表达有关。

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中英文缩略词表

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

实 验 结 果

3.1 ChR或TRAIL单用及两者合用对人肝癌Bel-7402细胞增殖活性的影响

3.2 亚毒性浓度的 ChR 或 TRAIL 单用及两者合用对人肝癌Bel-7402细胞凋亡的影响

3.3 亚毒性浓度的 ChR 或 TRAIL 单用及两者合用对人肝癌Bel-7402细胞DNA断裂的影响

3.4 ChR对人肝癌Bel-7402细胞DR5表达的影响

3.5 DR5/Fc嵌合蛋白对亚毒性浓度的ChR 与TRAIL合用诱导人肝癌Bel-7402细胞死亡率的影响

3.6 DR5/Fc嵌合蛋白对ChR调节人肝癌Bel-7402细胞DR5表达的影响

讨论

结论

参考文献

综述

硕士期间发表的论文

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