实验性末端回肠炎集合淋巴结及其淋巴细胞增殖与凋亡的研究

摘要

目的:本研究采用回肠末端-盲肠侧侧吻合术建立实验性末端回肠炎动物模型,观察发病过程中回肠末端集合淋巴结(PP结)及其淋巴细胞增殖和凋亡的情况;探讨PP结及其淋巴细胞在发病过程中的作用,完善末端回肠炎的发病机制,为末端回肠炎的临床诊治及科研提供一定的指导作用。
　　方法:选用清洁级SD大鼠,随机分为造模组、缝线组、对照组,每组30只,分别予以回肠末端-盲肠侧侧吻合术、回肠末端缝手术线、仅麻醉不手术的处理。术后2、4、8周分批处死大鼠,取末端回肠组织,分别观察其病理学改变,及PP结及其淋巴细胞增殖和凋亡的情况并分析。
　　结果:
　　1.末端回肠组织病理学改变:造模组术后2周为急性炎症的表现,炎症仅限于粘膜层,粘膜以中性粒细胞浸润为主,术后4周炎症渐加深,炎症细胞由中性粒细胞渐转为淋巴细胞浸润为主,充血出血的急性炎症表现渐减轻,而病变侵及粘膜下层同时伴有少量成纤维细胞增生,至第8周时为典型的慢性炎症的表现,粘膜以淋巴细胞浸润为主。
　　2.PP结及其淋巴细胞增殖和凋亡的情况
　　2.1PP结数量与集合淋巴结淋巴细胞总数的变化:与对照组相比,缝线组在第2周和第4周时,PP结个数有少量增加(P2周>0.05、P4周<0.05),第8周时,PP结个数与对照组相似(P8周>0.05)。而造模组在第2周和第4周时,PP结个数显著增加(P2周<0.05、P4周<0.01),第8周时,PP结个数少量增加(P8周>0.05)。PP结淋巴细胞总数的变化情况与PP结个数相似。
　　2.2PP结淋巴细胞凋亡率和增殖率的变化:与对照组相比,缝线组和造模组在第2周和第4周时,PP结淋巴细胞少量细胞凋亡,两者相比无差异性(P2周、4周>0.05),第8周时,缝线组和造模组PP结淋巴细胞均发生大量细胞凋亡(P8周<0.01),两者相比具有显著性差异(P<0.01)。PP结淋巴细胞数的增殖情况与PP结淋巴细胞总数增加情况相似。
　　2.3凋亡DNA梯度条带的变化:对照组2、4、8周,缝线组2、4周以及造模组2、4周大鼠回肠PP结淋巴细胞小分子DNA琼脂糖凝胶电泳结果中未见200bp小分子DNA条带,而缝线组8周,造模组8周大鼠回肠PP结淋巴细胞小分子DNA表现为典型的“梯形”(200bp、400bp)条带,但造模组200bp条带较缝线组为明显,表明造模组的细胞凋亡更为显著。
　　2.4PP结淋巴细胞凋亡核染色(hoechst33258)的变化:与对照组相比,缝线组和造模组在第2周和第4周时,PP结淋巴细胞染核细胞数明显增加,两者相比具有显著性差异(P<0.05),与PP结淋巴细胞总数增加情况相似。第8周时,缝线组和造模组PP结淋巴细胞均发生大量细胞凋亡,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。而且造模组出现明显的凋亡核形态,核呈固缩状态,可见新月状核。
　　结论:
　　1.在实验性末端回肠炎造模2-8周内,末端回肠粘膜炎症急性期以中性粒细胞浸润为主,慢性期以淋巴细胞浸润为主。
　　2.在实验性末端回肠炎造模2-8周内,PP结及其淋巴细胞呈现先增殖为主、后凋亡为主的变化。
　　3.持续的免疫反应在末端回肠炎发病过程中起着不可忽视的作用。

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中文摘要

英文摘要

前言

实验材料

一、主要试剂

二、主要仪器

实验方法

一、实验动物分组

二、动物模型的制作

三、标本的采集及处理

四、检测指标及方法

五、统计学处理

实验结果

1.回肠末端组织病理学改变

2.SD大鼠集合淋巴结数量与集合淋巴结淋巴细胞总数的变化

3.SD大鼠集合淋巴结淋巴细胞凋亡率和增殖率的变化

4.SD大鼠集合淋巴结淋巴细胞凋亡DNA梯度条带特征

5.SD大鼠集合淋巴结淋巴细胞细胞凋亡核染色特征

讨论

结论

参考文献

综述

研究生期间发表的论文

致谢