肺癌细胞系PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化及对表达的影响研究

摘要

目的：研究A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）的PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化状态及其对基因表达水平的影响。
　　方法：体外培养 A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系），并以HBE(正常支气管细胞系)作为对照细胞系，用MSP检测PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的甲基化状态，利用RT-PCR检测 PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的mRNA表达水平，利用Western-blot检测PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的蛋白表达水平，用不同浓度梯度的去甲基化药物（5-aza-2dc）对各肺癌细胞系进行去甲基化处理，观察处理前后细胞的生长曲线变化并检测PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化状态的变化及mRNA和蛋白质表达水平的变化。
　　结果：⑴A549（肺腺癌细胞系）中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因存在高甲基化，HTB-182（肺鳞癌细胞系）中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因存在高甲基化，HBE(正常支气管上皮细胞系)中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因存在低甲基化。⑵经过不同浓度的去甲基化药物（5-aza-2dc）处理后，A549（肺腺癌细胞系）中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化程度逐渐依次减弱，HTB-182(肺鳞癌细胞系)中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化程度逐渐依次减弱，HBE(正常支气管上皮细胞系)中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化程度无明显变化。A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）中随着去甲基化药物浓度的增加，PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的甲基化程度逐渐减弱，mRNA及蛋白表达水平逐渐上升，而在HBE(正常支气管上皮细胞系)中随着去甲基化药物浓度的增加，mRNA及蛋白表达水平无明显变化。⑶MTT结果显示，经过不同浓度的去甲基化药物（5-aza-2dc）处理后，A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）增殖抑制与去甲基化药物（5-aza-2dc）的浓度呈正相关，5-aza-2dc对HBE(正常支气管上皮细胞系)的增殖抑制没有表现出明显的效应。
　　结论：A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因都存在甲基化，而且基因的甲基化导致了PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的mRNA及蛋白表达水平的下降，去甲基化药物（5-aza-2dc）能够逆转PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的甲基化状态并能恢复PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的mRNA及蛋白表达水平。

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主要缩略语

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

一. 主要试剂及来源

二. 主要仪器

三. 细胞系

四.实验方法

实 验 结 果

1. 5-aza-2dC对肺癌细胞系生长曲线影响

2.PRDM2甲基化检测结果

3.PRDM5甲基化检测结果

4.PRDM16甲基化检测结果

5.PRDM2 RT-PCR检测结果

6.PRDM5 RT-PCR检测结果

7.PRDM16 RT-PCR检测结果

8.PRDM2 蛋白表达

9.PRDM5 蛋白表达

10.PRDM16 蛋白表达

讨论

结论

参考文献

附图

综述：PRDM基因家族与肿瘤

硕士期间发表论文

致谢