雷帕霉素-CD96免疫胶束的制备及表征与靶向性初步分析

摘要

目的：制备雷帕霉素-CD96免疫胶束并对其进行表征分析，体外探讨免疫胶束对HL-60细胞的靶向特异性。
　　方法：比较成膜法和溶剂蒸发法制备胶束的优劣；采用正交设计对制备处方进行优化，筛选出最佳制备工艺；动态激光散射仪检测径粒、分布和zeta电位；芘荧光探针光谱法测定临界胶束浓度；紫外分光光度法测定载药胶束的包封率和载药量，并考察此法测定雷帕霉素含量的精密度和适用性。在筛选出载药胶束最佳制备工艺的基础上，将CD96单抗与Mal-PEG-DSPE和载药胶束相连接，制备雷帕霉素-CD96免疫胶束；将制备好的空白胶束、载药胶束、免疫载药胶束置于4℃条件下冷藏保存，每隔一段时间重新测量一次粒径、zeta电位和包封率，观察胶束溶液的稳定性；通过WST-8法测定3种胶束对急性髓系白血病HL-60细胞的杀伤作用，初步分析其靶向特异性。
　　结果：成膜法制备的胶束粒径较大且分布不均一，呈多峰分布，粒径在413nm左右。而溶剂蒸发法制备的胶束粒径分布窄，分散性好。溶剂蒸发法制备的空白胶束、载药胶束、免疫载药胶束的平均粒径分别为62.8、78.2和103.1nm，zeta电位分别为-15.8、-20.2和-20.6mv。因此，后续实验采用溶剂蒸发法制备胶束。正交试验筛选出的最佳处方是有机相/水相体积比为1:10，药物和嵌段材料质量比为1:10，药物在有机溶剂中的浓度为1mg/mL，水相（PBS）pH值为7，即二氯甲烷1mL、PBS10mL、PBS的pH=7、雷帕霉素1mg、mPEG-PLA10mg。芘荧光探针法测得临界胶束浓度为3.16mg/L，紫外分光光度法测得包封率为51.3％，载药量为5.13%，此法的精密度和加样回收率符合验收标准。3种胶束在4℃条件下保存稳定性良好。WST-8结果显示细胞处理24小时后，药物浓度为0.01μg/mL时对细胞的毒性无显著性差异，但当浓度高于0.1μg/mL时雷帕霉素-CD96免疫胶束组和雷帕霉素胶束组对细胞的毒性作用均强于雷帕霉素溶液组（P<0.05），且免疫胶束组与相对应浓度的普通胶束组相比亦有显著性差异（P<0.05）。细胞处理48小时后，从浓度0.01μg/mL开始，3种药物即对HL-60细胞有杀伤作用，效应趋势与24小时时相同。
　　结论：
　　1.采用溶剂蒸发法成功制备了胶束、雷帕霉素胶束和雷帕霉素-CD96免疫胶束，并筛选出最优处方。
　　2．分析了雷帕霉素胶束和雷帕霉素-CD96免疫胶束的表征和稳定性。
　　3．雷帕霉素胶束和雷帕霉素-CD96免疫胶束具有靶向性，免疫载药胶束的主动靶向性更强。

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主要英文缩略语索引

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前言

材料和方法

一、主要试剂和材料

二、主要仪器

实验方法

1.嵌段共聚物的合成

2.胶束的制备和工艺筛选

3.雷帕霉素胶束的表征

4.聚合物胶束的稳定性考察

5.细胞毒实验

6.统计学方法

实验结果

一、胶束的制备

二. 胶束的表征分析

三. 胶束的靶向性分析

讨论

结论

参考文献

综述：聚合物胶束在生物医药学领域的应用及研究进展

硕士期间发表的论文

致谢