柴朴汤对气道上皮细胞表达Eotaxin和STAT6的影响

摘要

目的：观察柴朴汤含药血清对气道上皮细胞Eotaxin和STAT6表达的影响，探讨柴朴汤含药血清治疗哮喘的分子机制。
　　方法：将48只雄性SD大鼠分为哮喘组、正常对照组及柴朴汤组，制备哮喘血清、正常大鼠血清及柴朴汤含药血清，将气道上皮细胞（Rat Trachea Epithelial，RTE）分为哮喘组（A组）、正常对照组（B组）与柴朴汤低剂量组0.75g/kg（C组）、柴朴汤中剂量组1.5g/kg（D组）、柴朴汤高剂量组3.0g/kg（E组）和空白对照组（F组）。免疫细胞化学法检测Eotaxin和STAT6的蛋白在RTE中的表达；半定量RT-PCR检测RTE中Eotaxin和STAT6的mRNA的表达。
　　结果：HE染色显示：正常大鼠气道周围无炎性细胞浸润；哮喘大鼠支气管及血管周围有大量嗜酸性细胞、淋巴细胞浸润，部分气道上皮脱落，气道平滑肌增厚，基底膜增厚，气道壁增厚，气道管腔狭窄。
　　免疫细胞化学蛋白半定量分析：A组Eotaxin、STAT6蛋白的OD值较F组明显增高，B、C、D、E组OD值介于两者之间。各组Eotaxin的OD值分别为：A组0.37±0.04、B组0.31±0.02、C组0.23±0.02、D组0.22±0.03、E组0.21±0.01、F组0.16±0.03。各组STAT6的OD值分别为：A组1.35±0.08、B组1.14±0.12、C组0.60±0.08、D组0.51±0.07、E组0.44±0.07、F组0.43±0.04。A组与F组比较，差异有显著性（P<0.05）；A、F组与B组比较，差异有显著性（P<0.05）；A组与C、D、E组相比较，差异有显著性（P<0.05）；C组与D组，D组与E组比较，差异无显著性（P＞0.05）；另外STAT6的C组与E组相比差异有显著性（P<0.05）。
　　RT-PCR半定量分析，Eotaxin的mRNA相对灰度值测定：A组Eotaxin mRNA的相对灰度值较F组明显增高，B、C、D、E组相对灰度值介于两者之间。各组Eotaxin的相对灰度值分别为：A组0.58±0.05、B组0.57±0.06、C组0.54±0.03、D组0.32±0.03、E组0.31±0.03、F组0.30±0.03。A组与F组比较，差异有显著性（P<0.05）；A组与D、E组相比较差异有显著性(P<0.05)，D组与E组相比差异无显著性(P＞0.05)；A组与C组相比较差异无显著性(P＞0.05)。
　　STAT6的mRNA相对灰度值测定：A组STAT6 mRNA的相对灰度值较空白对照组明显增高，B、C、D、E组相对灰度值介于两者之间。各组STAT6的相对灰度值分别为：A组1.32±0.06、B组1.21±0.08、C组0.83±0.03、D组0.54±0.04、E组0.45±0.02、F组0.32±0.02。A组与F组比较，差异有显著性（P<0.05）；A、F组与B组比较，差异有显著性（P<0.05）；A组与C、D、E组相比较，差异有显著性（P<0.05）；C组与E组，C组与D组，D组与E组相比差异有显著性（P<0.05）。
　　结论：1.哮喘大鼠血清能够诱导气道上皮细胞 Eotaxin和 STAT6的表达增加；
　　2.柴朴汤含药血清可以抑制气道上皮细胞Eotaxin和STAT6的表达。

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主要缩略语中英文索引

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前言

实验材料

一、主要试剂

二、主要仪器

实验方法

一、实验动物的饲养

二、柴朴汤药液的制备

三、细胞培养与实验分组

四、实验方法

实验结果

一、病理组织学改变

二、Eotaxin、STAT6蛋白表达半定量分析

三、RT-PCR检测各组RTE中Eotaxin和STAT6mRNA表达量

四、相关性分析

讨论

一、 哮喘血清及柴朴汤含药血清的制备

二、气道上皮细胞在哮喘气道炎症中的作用

三、Eotaxin与气道炎症

四、STAT6与气道炎症

结论

参考文献

综述

致谢