7-二氟亚甲基-5,4'-甲氧基金雀异黄素对高糖诱导猴视网膜微血管内皮细胞损伤拮抗作用研究

摘要

目的:研究7-二氟亚甲基-5,4’-甲氧基金雀异黄素(7-Difluoromethylyl-5,4’-dimethoxygenistein,dFMGEN)对高糖诱导猴视网膜血管内皮细胞(simian retinal endothelial cells,RF-6A)损伤作用的影响,为糖尿病视网膜病变(diabetic retinophthy,DR)的药物防治提供新的思路和理论依据。
　　方法:体外培养猴视网膜微血管内皮细胞,用高浓度葡萄糖孵育细胞72小时,通过检测培养液上清中乳酸脱氢酶(lactic acid dehydrogenase;LDH)活性、细胞增殖抑制率和细胞凋亡率,建立高糖诱导内皮细胞损伤和凋亡模型。实验分组如下(1)空白对照组(2)高糖损伤组(3)溶媒对照组(4)先导化合物组(5)7-二氟亚甲基-5,4’-甲氧基金雀异黄素组(6)阳性药物对照组。在80mmol/L葡萄糖孵育 RF-6A细胞72小时之前30分钟预先加入 DMSO、金雀异黄素(Genistein;GEN)、7-二氟亚甲基-5,4’-甲氧基金雀异黄素和维生素 B1。应用MTT比色法法检测内皮细胞生长和增殖活性;LDH法测定细胞培养液中LDH活性;PI染色流式细胞计数法(lactic acid dehydrogenase; FCM)分析内皮细胞凋亡程度。
　　结果:高浓度葡萄糖(80mmol/L)孵育视网膜微血管内皮细胞72小时,乳酸脱氢酶(lactic acid dehydrogenase;LDH)活性增高;内皮细胞生长和增殖受到明显抑制;内皮细胞凋亡增多。用7-二氟亚甲基-5,4’-甲氧基金雀异黄素预先保护后可见,细胞生长和增殖活性呈浓度依赖性升高,LDH释放减少;细胞凋亡率呈浓度依赖性降低。1、MTT比色法测定结果示:用dFMGEN(10、3、1、0.3、0.1μmol/L)以及先导化合物金雀异黄素(Genistein100μmol/L)、阳性对照物维生素B1(100μmol/L)处理的高糖损伤细胞增殖抑制率分别是27.26％、45.2%、46.78%、49.02%、52.22%、29.11%、30.1%。其中dFMGEN的10μmol/L、Genistein以及维生素B1组与高糖损伤组相比均具有显著性差异(P<0.05);而dFMGEN的10μmol/L组对高糖损伤细胞的保护作用优于其先导化合物 Genistein(100μmol/L)组。2、检测LDH活性结果显示:dFMGEN(10μmol/L)组LDH释放的量较高糖损伤组明显减少,具有显著性差异(P<0.01)。3、PI染色FCM检测结果:dFMGEN(0.1、0.3、1、3、10μmol/L)依次降低高糖诱导的细胞凋亡,且10μmol/L组作用明显优于其先导化合物金雀异黄素(Genistein100μmol/L)组、阳性对照物维生素B1(100μmol/L)组。
　　结论:7-二氟亚甲基-5,4’-甲氧基金雀异黄素(dFMGEN)对高糖诱导视网膜微血管内皮细胞损伤有拮抗作用且在一定程度上优于金雀异黄素,并且其保护作用呈剂量依赖性。

目录

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声明

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中文摘要

英文摘要

实验材料

1、细胞与细胞培养

2、药品和试剂

3、仪器设备

实验方法

1、实验用液配制

2、高浓度葡萄糖诱导视网膜微血管内皮细胞损伤模型的建立

3、7-二氟亚甲基-5，4’-甲氧基金雀异黄素（dFMGEN）抗高浓度葡萄糖损伤活性测定

4、统计学处理

实验结果

１、高浓度葡萄糖诱导猴视网膜血管内皮细胞 RF-6Ａ细胞损伤模型的制备

2、7-二氟亚甲基-5，4’-甲氧基金雀异黄素（dFMGEN）拮抗高浓度葡萄糖损伤视网膜微血管内皮细胞活性测定

讨论

结论

参考文献

附 录（一）

附 录(二)

综述

成果目录

致谢