Toll样受体2、4及髓样分化因子88在实验性末端回肠炎发病过程中的变化及其意义

摘要

目的：探讨 TLR2、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)在实验性慢性末端回肠炎发病过程中表达水平的变化及其相关意义。
　　方法：60只雄性SD大鼠随机分成造模组、缝线组、对照组，每组20只。造模组行末端回肠-盲肠侧侧吻合术，缝线组于回肠末端作手术缝线，对照组只给予麻醉。术后2周和8周时每组各取10只SD大鼠，收集距吻合口1-4cm处末端回肠组织，肉眼观察后行切片镜下观察，再分别利用Western Blot和实时定量PCR（Real-Time PCR，RT-PCR）方法，测定实验性大鼠CTI中TLR2、TLR4、MyD88蛋白表达和mRNA的值，分析三种因子在CTI中的变化及其相关性。结果：
　　1.各组SD大鼠死亡率各组死亡率差异无统计学意义（χ2=2.105,P=0.349）。2.各组SD大鼠的一般情况术后3天-2周造模组及缝线组SD大鼠均有不同程度的脱毛、精神萎靡、食欲差、体重下降等。在恢复进食后各组一般情况开始好转，但造模组恢复较慢，术后4周-8周三组大鼠无明显差异（P＞0.05）。3.各组SD大鼠末端回肠组织肉眼观与病理术后2周，肉眼及镜下观见造模组及缝线组表现为急性炎症反应，两组炎症评分均较对照组高；术后8周，肉眼及镜下观见造模组表现为慢性炎症改变。而缝线组回肠末端组织未见明显炎性细胞浸润及结构破坏，造模组炎症评分比缝线组及对照组均显著升高。
　　4.各组SD大鼠回肠末端组织TLR2、4及其MyD88的表达水平
　　术后2周及8周三组SD大鼠TLR2、TLR4、 MyD88的表达水平差异均有统计学意义（TLR2：F2W=177.3,P2W=0.000；F8W=594.1,P8W=0.000）；（TLR4：F2W=1113.0,P2W=0.000；F8W=7496.0,P8W=0.000）；（MyD88：F2W=156.1,2W=0.000；F8W=994.7, P8W=0.000），表明三个因子的表达在造模组中有显著增加。术后8周与2周对比，缝线组及造模组SD大鼠末端回肠组织中TLR2、TLR4、MyD88的表达水平均有统计学意义（TLR2：t缝=7.6223,P缝=0.0000；t造=16.7251,P造=0.0000）；（TLR4：t缝=11.0262,P缝=0.0000；t造=76.7887,P造=0.0000）；（MyD88：t缝=24.4459,P缝=0.0000；t造=20.7673,P造=0.0000），且造模组升高明显较缝线组显著。结果表明 TLR2、TLR4、 MyD88在末端回肠炎的发病过程中有明显的升高，并与末端回肠炎症存在时间及炎症程度有相关性。
　　造模组 SD大鼠不同时间节点三种因子表达的比较经方差分析，它们表达水平差异均有统计学意义（F2W=26.0,P2W=0.000；F8W=294.5,P8W=0.000）；且2周至8周TLR2、TLR4、MyD88的升高率分别为158.88％、458.68%、233.87%， TLR4表达水平的升高率更显著。
　　5.TLR2及TLR4与MyD88的关系。实验表明，在实验性末端回肠炎发病过程中TLR2、TLR4、MyD88表达呈正相关，造模组8周， TLR2、TLR4与MyD88的相关系数较2周更高，表明三者的表达与炎症程度呈正相关。
　　结论：
　　1.TLR2、TLR4、MyD88在CTI中表达增加，均与炎症程度呈正相关；
　　2.TLR4表达水平在CTI发病时较TLR2及MyD88升高更显著，推测革兰阴性菌感染可能是CTI发病的启动因子；
　　3.TLR2及TLR4可能通过MyD88依赖信号转导通路的激活在CTI发病过程中发挥重要作用。

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