活性氧介导5,7-二甲氧基黄酮诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的实验研究

摘要

目的:研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)是否具有诱导人结肠癌 HT-29细胞凋亡作用；并探讨其作用机制是否涉及促进活性氧(ROS)生成。
　　方法:体外培养人结肠癌 HT-29细胞，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定5,7-DMF对HT-29细胞组蛋白/DNA碎片的影响。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析5,7-DMF对 HT-29细胞凋亡率的影响；二氯荧光素二乙酯(DCFH-DA)荧光标记FCM检测5,7-DMF对HT-29细胞ROS生成的影响。
　　结果:ELISA测定结果显示，5,7-DMF以浓度依赖方式诱导人结肠癌HT-29细胞DNA组蛋白/DNA碎片水平增高。PI染色FCM结果表明，5,7-DMF促进HT-29细胞凋亡率增加，呈浓度依赖性。DCFH-DA荧光标记FCM结果发现，5,7-DMF显著激活HT-29细胞ROS产生。此外，N-乙酰半胱氨酸(NAC,10 mmol/L)预孵育能有效阻断5,7-DMF诱导HT-29细胞ROS生成和细胞凋亡作用。
　　结论:
　　1.5,7-DMF具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用，呈浓度依耐性。
　　2.5,7-DMF能有效刺激HT-29细胞ROS生成。
　　3.5,7-DMF诱导HT-29细胞凋亡作用与其促进细胞内ROS增加相关。

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前言

材料与方法

1 材料

1.1 细胞与细胞培养

1.2 受试物与试剂

1.3仪器设备

2 方法

2.1 试剂配制

2.2组蛋白/DNA碎片的含量测定

2.3 PI染色流式细胞分析

2.4 活性氧测定

2.5 统计学处理

实 验 结 果

3.1 5, 7-DMF对人结肠癌HT-29细胞组蛋白/DNA碎片水平的影响

3.2 5, 7-DMF对人结肠癌HT-29细胞凋亡率的影响

3.3 5, 7-DMF对人结肠癌HT-29细胞ROS生成的影响

3.4 NAC对5, 7-DMF诱导人结肠癌HT-29细胞ROS生成的影响

3.5 NAC对5, 7-DMF诱导人结肠癌HT-29细胞DNA断裂的影响

3.5 NAC对5,7-DMF诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡率增加的影响

讨论

结论

参考文献

综述

硕士期间发表论文

致谢