吉西他滨联合顺铂新辅助化疗对非小细胞肺癌TXNIP基因表达的影响

摘要

目的：研究吉西他滨联合顺铂新辅助化疗对非小细胞肺癌 TXNIP基因表达的影响。
　　方法：获取非小细胞肺癌患者化疗前的肿瘤标本及采用吉西他滨联合顺铂方案（GP）新辅助化疗2个周期后的肿瘤标本，提取组织mRNA，实时定量PCR检测硫氧还蛋白结合蛋白(Thioredoxin-interacting protein，TXNIP) mRNA的表达，免疫组化和Western blot分析蛋白表达变化，比色法测定硫氧还蛋白还原酶（TrxR）的活性；同时体外培养肺癌细胞系 NCI-H1792，采用0.2mg/L吉西他滨联合0.5mg/L顺铂与之孵育24h，WST-1实验分析细胞增殖情况；实时定量PCR检测TXNIP蛋白表达；Western blot法观察蛋白表达变化；比色法检测TrxR的酶活性。
　　结果：
　　1）正常人肺组织中TXNIP呈一定水平表达，相比之下，NSCLC患者体内TXNIP mRNA显著降低。当患者经2周期GP方案化疗后，TXNIP mRNA表达水平明显增高；
　　2）免疫组化及Western blot法检测结果显示，正常人群肺组织中TXNIP呈一定量的表达，而NSCLC患者肺组织中TXNIP表达量极低。而经GP方案治疗后，TXNIP的含量增高；
　　3） NSCLC患者中TrxR活性明显高于正常对照组（P<0.05）。GP治疗后，TrxR活性明显降低（P<0.05）；
　　4）0.2mg/L吉西他滨联合0.5mg/L顺铂作用细胞24h后，即可将NCI-H1792细胞增殖率降低至88％。此外，随着浓度的增高，细胞增值率逐渐降低；
　　5）NCI-H1792中TXNIP mRNA和蛋白表达很低。不同浓度吉西他滨联合顺铂处理后，其mRNA及蛋白表达水平随着其浓度的递增而增多；
　　6）TrxR酶学结果显示，吉西他滨联合顺铂处理后可显著降低TrxR的酶活性，其中用高浓度吉西他滨和顺铂处理 NCI-H1792细胞后，其酶活性降低至43%。
　　结论：
　　1.吉西他滨联合顺铂化疗能上调非小细胞肺癌TXNIP基因和蛋白的表达。
　　2.吉西他滨联合顺铂干预能上调体外肺癌细胞系NCI-H1792细胞TXNIP基因和蛋白的表达。

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主要英文缩略语索引

中文摘要

英文摘要

第1章 前 言

第2章 材料与方法

1主要实验仪器

2 主要实验试剂

实验方法及步骤

1 研究对象

2 治疗方法

3 mRNA表达检测（RT-PCR）

4 免疫组化检测TXNIP表达

5蛋白表达测定（Western Blot）

6 硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测

7 NCI-H1792细胞的冻存、复苏、传代和培养

8 药物配制

9 实验分组与处理

10 细胞活性测定（WST-1法）

11 统计学方法

第3章 结 果

1. GP治疗方案对TXNIP mRNA表达的影响

2. GP治疗方案对组织中TXNIP表达的影响

3. GP治疗方案对细胞TXNIP表达的影响

4. GP治疗方案对肺癌组织中TrxR活性的影响

5. 吉西他滨联合顺铂对NCI-H1792细胞增殖的影响

6.吉西他滨联合顺铂对NCI-H1792细胞中TXNIP mRNA表达的影响

7. 吉西他滨联合顺铂对NCI-H1792细胞TXNIP蛋白表达的影响

8. 吉西他滨联合顺铂对NCI-H1792细胞TrxR活性的影响

第4章 讨 论

第5章 结 论

参考文献

综述:TXNIP在肿瘤中的作用研究进展

攻读硕士研究生期间主要的研究成果

致谢