Kallistatin对脓毒症大鼠血清炎症介质及肺组织细胞凋亡的作用

摘要

目的：探讨人激肽释放酶结合蛋白（Kallistatin，KS）重组体腺病毒（Ad-KS）对脓毒症大鼠血清炎症介质及肺组织细胞凋亡的作用。
　　方法：
　　1、清洁级健康雄性SD大鼠32只，体重280±20g，随机分成4组，分别为假手术组（SC组）、脓毒症组（SEP组）、Ad-KS处理组（KS组）、空腺病毒（Ad-Null）对照组（AC组）。盲肠穿孔结扎术（cecal ligation and puncture，CLP）制备大鼠脓毒症模型。
　　2、 KS组大鼠CLP术前48h经大鼠尾静脉注射Ad-KS进行基因转染，使大鼠体内表达人KS蛋白。AC组注射Ad-Null腺病毒作为对照。
　　3、所有存活大鼠术后24h经腹主动脉采血行血气分析，经心脏采血行血常规、血生化，留取血清备用，放血法处死大鼠，快速取肺组织。
　　4、苏木精-伊红染色（HE）观察肺组织病理形态改变。ELISA法检测血清炎症介质TNF-α、IL-6及IL-10水平，Western Blot法检测肺组织Caspase-3、Bax及Bcl-2的表达。TUNEL检测观察肺组织细胞凋亡情况。
　　结果：
　　1、肺组织常规病理切片及HE染色发现，SC组肺泡结构完整，间质未见增厚水肿，无明显中性粒细胞及红细胞浸润。SEP组、AC组肺泡萎陷，肺泡腔缩小，肺间质增厚、充血水肿，间质内大量中性粒细胞、红细胞浸润，部分可见肺实变。KS组与SEP组、AC组比较，肺泡萎陷程度减轻，间质充血水肿及浸润减轻。
　　2、ELISA检测血清炎症介质水平，SEP组、AC组血清促炎因子TNF-α、IL-6较SC组升高（P＜0.05），但抗炎因子IL-10无明显升高。KS组血清TNF-α、IL-6较SEP组、AC组下降，抗炎因子IL-10升高（P＜0.05）。
　　3、Western blot检测肺组织凋亡相关蛋白表达，SEP组、AC组肺组织 Caspase-3表达较 SC组明显增加（P＜0.05）。KS组肺组织Caspase-3表达较SEP组、AC组减少。促凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2表达在SC组、SEP组、AC组间无明显差异。KS组其Bax表达较其他三组减少，Bcl-2表达增加（P＜0.05）。
　　4、TUNEL观察肺组织细胞凋亡情况，SEP组、AC组较SC组肺组织细胞凋亡增加，KS组与 SEP组、AC组相比凋亡减少。SEP组与AC组间无明显差异。
　　结论：
　　1、Kallistatin重组体腺病毒降低脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-6水平、升高IL-10水平，发挥抗炎作用。
　　2、Kallistatin重组体腺病毒抑制脓毒症大鼠肺组织细胞凋亡及Caspase-3的表达，减轻肺损伤。

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缩略语表

第一章 前言

第二章 实验材料

2.1 实验动物

2.2 主要试剂、耗材及来源

2.3 相关试剂的配置

2.4 主要仪器及设备

第三章 实验方法

3.1实验分组

3.2 基因转染

3.3 动物造模

3.4 标本采集

3.5 ELISA法检测血清炎症介质水平

3.6 WB检测定大鼠肺组织凋亡相关蛋白的表达

3.7 肺组织HE染色

3.8 TUNEL

3.9 统计学处理

第四章 实验结果

4.1 一般情况

4.2 肺组织病理形态学变化

4.3 血清炎症介质水平

4.4 肺组织凋亡相关蛋白表达

4.5 TUNEL

第五章 讨论

第六章 结论

参考文献

综述:Kallistatin 的生物学作用及机制研究进展

作者攻读学位期间的科研成果

致谢