Rab30对神经细胞高尔基体碎裂及细胞凋亡的作用研究

摘要

目的：探讨Rab30对神经细胞高尔基体碎裂及细胞凋亡的影响。
　　方法：
　　1、实验分组：选取处于对数期生长的小鼠海马神经细胞（HT22）进行病毒转染，转染成功后分别将空载组、Rab30过表达组予以浓度为0.2μg/mL毒胡萝卜素（TG）3h、5h干预，具体分6组：正常组、空载组、空载TG3h组、空载TG5h组、Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组。
　　2、Western-blot检测各组细胞内 Rab30、GM130的蛋白表达情况；
　　3、Real-time PCR检测各组细胞内Rab30、GM130的mRNA表达水平；
　　4、CCK-8法检测各组细胞的活性；
　　5、免疫细胞化学方法观察各组细胞高尔基体的形态变化；
　　6、流式细胞仪测定各组细胞凋亡率的变化。
　　结果：
　　1、慢病毒转染HT22细胞72小时后，在荧光显微镜下观察空载组和 Rab30过表达组细胞荧光的表达情况，约有超过85%的细胞发出绿色荧光。
　　2、Western blot检测结果：与正常组或空载组比较，空载TG3h组、空载TG5h组细胞内Rab30、GM130蛋白表达减少（P<0.05）。Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组细胞内Rab30、GM130蛋白表达显著增加，分别与空载TG3h组、空载TG5h组比较（P<0.05）。
　　3、RT-PCR检测结果：与正常组或空载组比较，空载TG3h组、空载TG5h组细胞内Rab30、GM130 mRNA表达降低（P<0.05）。Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组细胞内Rab30、GM130 mRNA表达显著增加，分别与空载 TG3h组、空载 TG5h组比较（P<0.05）。
　　4、CCK-8结果：与正常组或空载组比较，空载TG3h组、空载TG5h组细胞存活率明显下降（P<0.05）。Rab30过表达 TG3h组、Rab30过表达TG5h组细胞存活率明显上升，分别与空载TG3h组、空载TG5h组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　5、免疫细胞化学结果显示：正常组或空载组中，TGN38标记的高尔基体结构紧凑，呈新月形紧密围绕在细胞核周围。空载TG3h组，高尔基体由紧凑的囊泡结构向胞浆散开，而空载TG5h组高尔基体碎裂明显增多，大部分呈点状或颗粒状散在整个胞浆中。Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组，分别与空载TG3h组、空载TG5h组比较，高尔基体碎裂明显减少。
　　6、流式细胞仪测定结果：与正常组或空载组比较，空载 TG3h组、空载TG5h组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。Rab30过表达TG3h组、Rab30过表达TG5h组，分别与空载TG3h组、空载TG5h组比较，细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。
　　结论：
　　神经细胞中Rab30的过表达，可能减少高尔基体的碎裂，降低神经细胞的凋亡。

目录

声明

主要英文缩略词表

第一章 前言

第二章 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

第三章 结果

3.1 Western-blot结果

3.2 PCR结果

3.2免疫荧光结果

3.4 CCK-8法结果

3.5 流式双染法结果

第四章 讨论

4.1 Rab30过表达慢病毒载体的构建

4.2 毒胡萝卜素诱导内质网应激

4.3 Rab蛋白与高尔基体

4.4 高尔基体碎裂与细胞凋亡

4.5 高尔基体碎裂与神经退行性疾病

第五章 结论

参考文献

综述:高尔基体与神经退行性疾病研究进展

研究生期间参与的科研项目及发表的论文

致谢