lncRNA-KAT7在非小细胞肺癌组织中的表达及对肺癌细胞侵袭转移的影响

摘要

背景与目的: 肺癌是全球最常见和最致命的恶性肿瘤之一。其中非小细胞肺癌（Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC）占肺癌所有类型的80%～85%。尽管肺癌的治疗水平和治疗效果在不断提升，但由于大多数肺癌患者在确诊时肿瘤细胞就已经发生较强的侵袭以及血行和淋巴转移，甚至步入终末期，且缺乏有效的治疗措施，患者中位生存期不足1年，5年生存率不足5%。非小细胞肺癌转移是一个复杂的、多因素调控的动态过程，其分子机制尚不明确。因此，开展肿瘤转移机制研究，对于开发阻止非小细胞肺癌发展和转移的治疗新方法具有重要的意义。长链非编码RNA(Longnon-coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度超过200nt，具有调控基因表达作用的非编码RNA。lncRNA可以参与在多个水平调控基因的表达，影响细胞的生长和发育，并且与疾病，尤其是肿瘤的发生、发展及预后有着密切的联系。 在前期的实验中，本课题组采用lncRNA基因芯片技术筛选出多个差异性表达的lncRNA，lncRNA-KAT7是其中表达差异较大的lncRNA之一。本研究旨在检测NSCLC患者lncRNA-KAT7基因在肺癌组织及癌旁正常肺组织标本中的表达情况，并分析其与NSCLC患者临床病理特征的相关性，进而了解lncRNA-KAT7在非小细胞肺癌中可能发挥的生物学功能，寻找其作用机制。 方法: 标本来源:釆用目的抽样的方法收集2017年2月-2017年6月，常德市第一人民医院和郴州市第一人民医院胸外科住院患者外科手术切除的NSCLC原发病灶的癌组织及相匹配的癌旁正常肺组织标本(癌旁的正常组织距离肿瘤组织边缘5cm以上)，成功收集到22例鳞癌组织标本和16例腺癌组织标本。 方法: 1.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测38例NSCLC原发病灶的癌组织及癌旁正常肺组织中lncRNA-KAT7的表达情况，并结合NSCLC患者的临床病理特征进行相关性分析。 2.选取肺癌细胞A549正常细胞培养，待培养瓶中细胞生长融合至80%-90%左右，用0.25%胰酶消化并传代，收取对数生长期的细胞进行实验。 3.成功构建lncRNA-KAT7的过表达载体pcDNA-lncRNA-KAT7，并用Lip2000脂质体瞬时转染的方法将pcDNA-lncRNA-KAT7转染到肺癌细胞株A549中，采用实时荧光定量PCR方法检测转染后细胞的lncRNA-KAT7相对表达水平。 4.采用Transwell实验检测lncRNA-KAT7对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果: 1.NSCLC组织中lncRNA-KAT7的表达水平显著低于配对的癌旁正常肺组织（P＜0.05），lncRNA-KAT7在NSCLC组织中的平均表达倍数是癌旁正常肺组织的0.55±0.88倍。以lncRNA-KAT7在NSCLC组织中的表达量与配对的癌旁正常组织中的表达量的比值＞1为分界标准，38例NSCLC患者中32例（84%）的癌组织中lncRNA-KAT7的表达水平明显低于配对的癌旁正常肺组织； 2.NSCLC组织中lncRNA-KAT7表达水平与患者年龄和淋巴结转移呈负相关，与NSCLC组织学类型有显著相关性（P＜0.05），而与患者性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度无明显相关性（P＞0.05）。 3.过表达lncRNA-KAT7的A549细胞株中的lncRNA-KAT7表达水平明显高于转染空载体的细胞株，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Transwell小室迁移和侵袭实验结果表明:与转染空载体的细胞株比较，A549细胞转染pcDNA-lncRNA-KAT7后迁移和侵袭能力明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论: 1.lncRNA-KAT7在NSCLC组织中表达显著下调。NSCLC组织中lncRNA-KAT7的表达水平与患者年龄和淋巴结转移呈负相关，与NSCLC组织学类型有显著相关性（P0.05），而与患者性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度无明显相关性（P＞0.05）。 2.lncRNA-KAT7能够抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭能力。

目录

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主要缩略词英文索引

第1章 绪 论

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 组织、细胞和质粒

2.1.2 主要相关试剂

2.1.3主要相关仪器设备

2.2 实验方法

2.2.1 pcDNA-lncRNA-KAT7重组质粒的构建

2.2.2 总RNA的提取

2.2.3实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA-KAT7的表达

2.2.4 实时荧光定量PCR(qRT- PCR)

2.2.5 细胞复苏

2.2.6细胞培养

2.2.7细胞传代

2.2.8 细胞瞬时转染

2.2.9 Transwell实验

第3章 结 果

3.1 lncRNA-KAT7基因的基本信息

3.2 NSCLC原发病灶的癌组织及匹配的癌旁正常肺组织中lncRNA-KAT7的表达水平

3.3 NSCLC组织中lncRNA-KAT7的表达量与临床病理特征的关系

3.4 lncRNA-KAT7过表达瞬时转染细胞系的建立

3.5 pcDNA-lncRNA-KAT7表达质粒瞬时转染A549细胞能够抑制细胞的迁移能力

3.6 pcDNA-lncRNA-KAT7表达质粒瞬时转染A549细胞能够抑制细胞侵袭能力

第4章 讨 论

第5章 结 论

参考文献

文献综述:非小细胞肺癌相关LncRNA的研究进展

资助本课题的基金项目

作者攻读学位期间的科研成果

致谢