IFN-γ下调EphA2抑制人前列腺癌PC3细胞迁移、侵袭及血管生成拟态形成

摘要

目的： 探讨干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）对人前列腺癌PC-3细胞迁移、侵袭及血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）形成的影响及其机制。 方法： 以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象，用不同浓度干扰素-γ处理（分别加10、100、1000μg/L）。划痕实验和侵袭实验分别评价PC3细胞的迁移和侵袭能力；三维培养观察PC3细胞血管生成拟态(VM)形成能力；RT-RCR检测PC3细胞中上皮细胞激酶2（Erythropoietin-producing hepatocellular carcinoma-A2，EphA2）mRNA表达水平；免疫印迹（Western Blot，WB）检测PC3细胞中EphA2蛋白表达。 结果： 1.划痕实验结果显示，不同浓度（10μg/L、100μg/L和1000μg/L）的IFN-γ对不同作用时间点（24h、48h和72h）的人前列腺癌PC3细胞的迁移距离均具有缩短作用，且随着IFN-γ浓度的增加，PC3细胞迁移的距离越短，表明IFN-γ能抑制PC3细胞的迁移能力（p＜0.05）。 2.Transwell侵袭实验结果显示，经不同浓度(10μg/L、100μg/L和1000μg/L)的IFN-γ处理24h后，PC3细胞的穿膜数均显著低于对照组（p＜0.01），表明IFNγ对PC3细胞的侵袭能力具有抑制作用。 3.三维培养结果显示，对照组细胞能够见到较多的VM管道结构形成；10μg/L的IFN-γ处理后，PC3细胞VM管道样结构明显减少；100、1000μg/L的IFN-γ处理后，PC3未见明显VM管道结构的形成，表明IFNγ对PC3细胞血管生成拟态形成能力具有抑制作用。 4.RT-PCR结果显示，不同浓度IFN-γ处理后的PC3细胞，EphA2mRNA的表达水平呈浓度依赖性地降低（p＜0.05和p＜0.01）；Western blot结果也显示，不同浓度IFN-γ处理后的PC3细胞，EphA2蛋白表达量呈浓度依赖性地降低（p＜0.05和p＜0.01）。 结论： IFN-γ对人前列腺癌PC3细胞迁移、侵袭及VM管道形成能力具有抑制作用，可能与其在mRNA水平和蛋白水平抑制EphA2的表达有关。

目录

声明

主要缩略语

第1章 前 言

第2章 方法与材料

2.1 实验材料

2.1.1主要试剂、耗材及来源

2.1.2 主要仪器

2.1.3 实验细胞

2.2实验方法

2.2.1细胞复苏

2.2.2细胞传代与换液

2.2.3细胞冻存

2.2.4细胞种板

2.2.5 实验分组

2.2.6划痕实验

2.2.7 Transwell侵袭实验

2.2.8 三维培养

2.4Western Blot检测IFN-γ对人前列腺癌PC3细胞EphA2蛋白表达的影响

2.4.1 蛋白提取

2.4.2 BCA法测蛋白浓度后将各样本蛋白浓度调整至一致后进行点样

2.4.3 SDS-PAGE电泳

2.4.4 免疫印迹操作-转膜

2.4.5 免疫检测

2.4.6 化学发光

2.5 统计学分析

第3章 实验结果

3.1 IFN-γ可抑制人前列腺癌PC3细胞迁移能力

3.2 IFN-γ可抑制人前列腺癌PC3细胞侵袭能力

3.3 IFN-γ可抑制人前列腺癌PC3细胞体外VM管道形成

3.4 IFN-γ可下调人前列腺癌PC3细胞EphA2 mRNA的表达

3.5 IFN-γ可下调人前列腺癌PC3细胞EphA2蛋白表达

第4章 实验讨论

第5章 实验结论

参考文献

综述干扰素-γ抗肿瘤的研究进展