适度运动通过增强自噬保护Ⅱ型糖尿病小鼠的肾损伤

摘要

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。它是世界上威胁人类健康的第三大慢性病。糖尿病肾病是糖尿病患者最重要的死亡原因。糖尿病肾病的发病机制很复杂，尚未完全阐明。自噬对维护细胞器功能和细胞内营养环境至关重要。另外自噬还参与体内系统性代谢平衡,它的失调会导致或加速代谢紊乱的发展。研究发现，自噬异常参与了糖尿病肾病的发生和发展。适量的运动能增强机体免疫力,改善体内环境,调节糖、脂肪和内分泌代谢,改善心肺功能等。人们已经发现,运动可激活自噬降解细胞器。那么自噬的减少可能是糖尿病肾病的发病机制之一,自噬的改善可能成为糖尿病肾病临床治疗的新靶点。 目的:探讨适度的运动是否能通过增强自噬来保护Ⅱ型糖尿病小鼠的肾损伤。 方法:50只小鼠适应性分笼饲养一个星期。分组，随机选取20只小鼠作为对照组,饲喂普通饲料,其余30只饲喂高脂高糖饲料。每天记录每只老鼠的平均饮食、饮水量和每周称一次体重。六周后,喂以高脂高糖饲料的小鼠,禁食不禁水12h,按100mg/kg体重的剂量腹腔注射1%的链脲佐菌素(STZ)柠檬酸缓冲溶液诱导Ⅱ型糖尿病。注射STZ十天后分别测定小鼠的空腹血糖，以空腹血糖大于11.1mmol/L作为Ⅱ型糖尿病模型的依据，成模后每周测一次血糖。将小鼠随机分为对照组和正常游泳组，成模小鼠随机分为模型组和糖尿病游泳组，二甲双胍组。游泳运动、灌胃二甲双胍干预处理七周后处死小鼠，摘眼球取血，血清做肾功能检测，取组织样品，进行肾脏组织的HE染色、免疫组化和Western blot检测相关蛋白。 结果:模型组小鼠血清胰岛素水平显著升高，而糖尿病游泳组血清胰岛素水平较模型组有所降低。模型组小鼠肾功能的各项生化指标也明显显示升高，肾重/体重比值也明显升高，而与模型组相比，糖尿病游泳组各项肾功能指标都有所降低，肾重/体重比值也有所降低，说明游泳运动对糖尿病小鼠的肾功能的损害有所改善。WB结果显示:与对照组比，LC3在模型组的表达明显减少(P＜0.05),而较模型组比，糖尿病游泳组的LC3又有所增加(P＜0.05)。与对照组比，模型组的p62表达显著增加，而较模型组比，糖尿病游泳组的p62又有所下降(P＜0.05)。免疫组化结果显示:与模型组比，糖尿病游泳组的LC3表达增加，p62的表达有所下降。结果显示，游泳运动增强了自噬的水平。 结论:适度的运动可以通过增强自噬来保护Ⅱ型糖尿病小鼠的肾损伤。

目录

声明

第1章 绪论

第2章 材料

2.1主要试剂

2.2主要仪器

第3章 实验方法

3.1动物实验

3.2肌酐、尿素氮、尿酸值采用全自动生化分析仪测定

3.3.1样品制备

3.3.2 BCA试剂盒检测蛋白浓度

3.3.3煮蛋白

3.3.4电泳

3.3.5转膜

3.3.6封闭

3.3.7一抗孵育

3.3.8二抗孵育

3.3.9显色

3.3.10分析

3.4 HE染色

3.5免疫组化

3.6统计学分析

第4章 实验结果

4.1 实验动物一般状况观察

4.2 糖尿病小鼠模型建立

4.3 口服葡萄糖耐量试验(OGTT)

4.4 空腹血清胰岛素水平的测定

4.5 各组小鼠肾重/体重比值的比较

4.6 各组小鼠肾功能比较

4.7 肾组织病理HE染色

4.8.1 糖尿病小鼠肾组织中p62水平的变化

4.8.2 糖尿病小鼠肾组织中LC3水平的变化

第5章 讨论

第6章 结论

参考文献

文献综述:二甲双胍药理作用及其机制研究进展

科研成果

致谢