三种鳖线粒体DNA部分基因序列的比较分析和分子鉴定标记

摘要

本文利用线粒体DNA分子标记技术研究了中华鳖、砂鳖和山瑞鳖线粒体DNA部分基因的序列并进行了比较分析，在分子水平证实了砂鳖为鳖属一新种并获得了这三种鳖各自的分子鉴定标记，主要结论如下：　　(1)对中华鳖、砂鳖线粒体DNA12SrRNA基因片段进行了序列测定和PCR-RFLP分析。结果表明：中华鳖、砂鳖线粒体DNA12SrRNA基因片段的碱基序列长度相同，均为562bp，其A、T、C、G含量相似，两序列间共有13处碱基不同，序列差异率为2.31﹪，而中华鳖与砂鳖各自个体间的平均序列差异率分别为0.53﹪和0.36﹪，种间差异显著；用内切酶MspⅠ酶切两种鳖的12SrRNA基因片段，在砂鳖中可得到大小为519bp和43bp两个片断，而中华鳖无此酶切位点，这可作为准确鉴别中华鳖和砂鳖的分子鉴定标记。(2)对三种鳖线粒体DNA两个rRNA基因全序列核苷酸差异率的分析表明：中华鳖与砂鳖12SrRNA基因序列间的差异率为4.0﹪，中华鳖、山瑞鳖间的序列差异率为11.0﹪，砂鳖、山瑞鳖间的序列差异率为10.8﹪；中华鳖与砂鳖16SrRNA基因全序列的差异率为4.0﹪，中华鳖、山瑞鳖间的序列差异率为13.2﹪，砂鳖、山瑞鳖间的序列差异率为12.8﹪。基于三种鳖mtDNA12SrRNA、16SrRNA基因全序列的系统进化分析结果均支持砂鳖为鳖属一新种。(3)对中华鳖、砂鳖和山瑞鳖线粒体DNA细胞色素b基因进行了序列测定、序列的比较分析、系统进化分析和PCR-RFLP分析。结果表明中华鳖、砂鳖与山瑞鳖线粒体DNACytb基因的序列全长相同，均为1140bp，其A、C、G、T含量相似。序列间的差异率分析表明：中华鳖与砂鳖此基因序列间的差异率为7.7﹪，中华鳖、山瑞鳖间的序列差异率为15.0﹪，砂鳖、山瑞鳖间的序列差异率为15.9﹪，种间差异显著，且中华鳖与砂鳖的差异率相对较小。PCR-RFLP分析表明：用内切酶NdeⅠ可准确鉴别砂鳖，而用内切酶BamHⅠ则可准确鉴别山瑞鳖。内切酶NdeⅠ和BamHⅠ的联用分析，可使这三种鳖在分子水平都得到明确的鉴定。

目录

文摘

英文文摘

绪论

1.1动物线粒体基因组的结构、特征与主要检测方法

1.2mtDNA多态性在动物系统学和种群识别、物种保护中的应用

1.3分子遗传标记及其在物种鉴定中的应用

1.4鳖科动物的生物学研究进展简介

1.5本研究的目的和意义

1.6本研究的主要内容

附图

第一章（Ⅰ)中华鳖与砂鳖线粒体DNA 12S rRNA基因部分序列的比较分析和他子记鉴定标

1.1实验材料和方法

1.2实验结果

1.3分析与讨论

第一章（Ⅱ)中华鳖、砂鳖和山瑞鳖线粒体DNA 12S rRNA 16S rRNA基因全序列的克隆和分析

1.4实验材料和方法

1.5实验结果

1.6分析与讨论

附图

第二章中华鳖、砂鳖和山瑞鳖线粒体DNA细胞b基因序列的比较分析和分子鉴定标记

2.1实验材料与方法

2.2实验结果

2.3分析与讨论

附图

结语

参考文献

附录硕士学习期间发表的主要论文

致谢

湖南师范大学学位论文原创性声明