肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱导人支气管上皮细胞SPLUNC 1表达的变化

摘要

目的:观察不同浓度肺炎支原体脂质相关膜蛋白(Mycoplasmapneumoniae lipid-associated membrane proteins,MP-LAMPs)在不同时间点对人支气管上皮细胞(HBECs)短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(Short Palate Lung and Nasal epithelium Clone1,SPLUNC1)表达的影响，探讨SPLUNC1在呼吸道感染中的作用及其表达与肺炎支原体感染的时效关系和量效关系。
　　 方法:
　　 ①通过间接免疫荧光法观察SPLUNC1蛋白在HBECs细胞内定位;
　　 ②不同浓度MP-LAMPs(0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL)刺激HBECs后，通过实时荧光定量FQ-PCR法检测不同时间点(2 h、4h、8h、16 h及24 h)SPLUNC1基因表达;同时用0.5μg/mLMP-LAMPs诱导HBECs不同时间点通过Western-blotting法检测SPLUNC1蛋白的表达。
　　 ③MTT法检测不同浓度的MP-LAMPs和LPS对HBECs细胞增殖的影响，找出对HBECs细胞增殖影响相似的MP-LAMPs与LPS浓度，比较MP-LAMPs与LPS刺激HBECs后，SPLUNC1基因表达的差异。
　　 结果:
　　 ①SPLUNC1蛋白主要分布于细胞胞浆中。
　　 ②在相同时间点，不同浓度的MP-LAMPs能诱导SPLUNC1表达上调，其中0.5μg/mL MP-LAMPs浓度组SPLUNC1基因表达量最显著，不同浓度组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01）;在同一浓度组，MP-LAMPs刺激细胞2h后SPLUNC1基因及蛋白表达量开始上调，并在4h时达高峰，随着时间延长逐渐下降，不同时间组两两比较差异有统计学意义(P＜0.01）。
　　 ③与MP-LAMPs刺激细胞后24 h内SPLUNC1基因表达先增高后降低不同，LPS刺激细胞后同时间内SPLUNC1基因表达呈持续增高趋势。
　　 结论:
　　 ①MP-LAMPs能诱导HBECs中的SPLUNC1基因和蛋白表达上调，并存在一定的时间和剂量依耐性，其表达量最佳浓度和时间点为0.5μg/mL MP-LAMPs刺激HBECs后4h。
　　 ②不同浓度的MP-LAMPs LPS刺激细胞后，24 h内SPLUNC1基因表达变化趋势不同。