ErbB4受体对人胆管细胞癌QBC939细胞系增殖与转移的影响

摘要

本文主要从以下几个部分展开论述：
　　第一部分 ErbB4在人类胆管癌QBC939细胞系中的表达
　　目的:研究ErbB4受体在人胆管癌QBC939细胞系细胞中的表达情况。
　　方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞系细胞，免疫荧光法检测ErbB4在胆管癌细胞中的表达情况。
　　结果:胆管癌QBC939细胞系中表达ErbB4蛋白。
　　结论:人胆管癌QBC939细胞中表达人类第4表皮生长因子受体(ErBb4)。证明本课题组选用QBC939细胞系来进行后续体外实验的可行性。
　　第二部分 阻断ErbB4受体对胆管癌QBC939细胞系细胞的增殖、迁移及侵袭的影响
　　目的:考察经AG1478特异性抑制剂阻断ErbB4受体对人胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。
　　方法:分别加入终浓度为0μmol/L，1μmol/L，5μmol/L，10μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L，100μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体，使用CCK-8法测量各组胆管癌细胞增殖情况，并利用SPSS软件计算AG1478对人胆管癌QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50值)。分别使用0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体，使用划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力的变化。分别使用0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L浓度AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体，使用Transwell小室法实验检测各组胆管癌细胞侵袭能力的变化。
　　结果: AG1478以浓度依赖方式抑制QBC939细胞增殖，计算其IC50值为:49.14μmol/L。AG1478抑制ErbB4受体后，胆管癌QBC939细胞的迁移、侵袭能力减弱。
　　结论:ErbB4抑制剂能在体外抑制人类胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭。
　　第三部分 抑制ErbB4受体能下调iNOS表达
　　目的:研究ErbB4受体实现其肿瘤生物学功能可能的涉及的分子机制。
　　方法:使用50μmol/L浓度阻断ErbB4受体，使用免疫蛋白印迹法测量阻断前后细胞裂解液中iNOS含量，比较阻断胆管癌细胞ErbB4受体能否抑制iNOS表达。分别使用浓度0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体，使用总一氧化氮检测试剂盒检测细胞培养液中NO含量变化。分别使用浓度0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体，使用ELISA法检测细胞培养液中VEGF含量变化。
　　结果:AG1478抑制ErbB4受体后，胆管癌QBC939细胞裂解液中iNOS含量减少。AG1478抑制ErbB4受体后，胆管癌QBC939细胞培养上清液中NO、VEGF含量减少，间接反映iNOS表达减少。
　　结论:ErbB4抑制剂能在体外抑制人类胆管癌QBC939细胞iNOS表达，并引起其下游NO以及相关因子VEGF分泌减少。

目录

摘要

前言

第一章 ErbB4在人类胆管癌QBC939细胞系中的表达

第一节 材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

第二节 结果

1 人胆管癌细胞系QBC939的培养及ErbB4受体的表达

第三节 讨论

第二章 阻断ErbB4受体对胆管癌QBC939细胞系细胞的增殖、迁移及侵袭的影响

第一节 材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

第二节 结果

1 AG1478对人胆管癌QBC939细胞系细胞增殖的影响及IC50值

2 AG1478对人胆管癌QBC939细胞系细胞迁移的影响

3 AG1478对人胆管癌QBC939细胞系细胞侵袭的影响

第三章 抑制ErbB4受体能下调iNOS表达

第一节 材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

第二节 结果

1 AG1478对人胆管癌QBC939细胞系细胞iNOS蛋白表达的影响

2 AG1478对人胆管癌QBC939细胞系细胞NO分泌的影响

3 AG1478对人胆管癌QBC939细胞系细胞VEGF分泌的影响

第三节 讨论

结论

参考文献

附录1：英文缩略词索引

附录2：综述

参考文献

攻读硕士学位期间的主要成果

致谢

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