溶栓剂基因的克隆与载体构建及苯噻草胺与旱地植物DNA相互作用的研究

摘要

通过查阅大量文献,确定开展溶栓剂基因克隆与表达及除草剂与旱地植物DNA的相互作用研究,取得了如下成果.1.纤溶酶原可在溶纤酶激活剂作用下被激活,形成具有生物活性、可催化血栓纤维蛋白水解的纤溶酶,从而消除血栓,治疗疾病.该实验室尝试采用转基因技术,将溶栓剂基因转入植物,利用植物反应器来生产溶栓药物.该论文进行了该项目的前期工作,运用DNA重组技术,将该实验室设计的溶栓剂基因亚克隆于穿梭质粒pBI121中,构建了溶栓剂基因表达载体pBI121-zzq,并将它转化大肠杆菌DH5α.穿梭质粒pBI121含有编码卡那霉素抗性的新霉素磷酸转移酶基因,用含有Km的培养基筛选菌株.从菌株中提取的重组质粒pBI121-zzq用琼脂糖凝胶电泳检测鉴定.在200bp左右有一大小与溶栓剂基因大小相符的条带,表明大肠杆菌转化体中含有溶栓剂的亚克隆质粒.pBI121-zzq转化LBA4404用Str和Km双抗培养基筛选,经琼脂糖电泳实验证实,pBI121-zzq在农杆菌LBA4404中成功表达,为开发新型药用植物奠定了基础.2.用紫外分光光度法研究了玉米和狗尾草等旱地植物DNA与除草剂的作用.首先优化了提取DNA的条件.(1)采用SDS法提取西红柿(含玉米)DNA.实验结果证实,提取西红柿、玉米DNA最优条件为:细胞提取液4.0ml,饱和KCl溶液1.5ml,酚/氯仿/异戊醇溶液为样液体积的0.8倍,其中酚与氯仿/异戊醇的比值为24:25:1,氯仿/异戊醇溶液为样液体积的0.7倍,异丙醇为样液体积的0.9倍.(2)采用紫外光谱法研究了玉米DNA和狗尾草DNA与除草剂苯噻草胺的相互作用.首次揭示苯噻草胺可使DNA双链解链,抑制DNA的复制,从而杀除杂草.苯噻草胺除草的最佳浓度在5.4×10<'-9>mol/L-1.8×10<'-4>mol/L范围之间;当浓度小于5.4×10<'-9>mol/L时,苯噻草胺对杂草的DNA没有影响;当浓度大于1.8×10<'-4>mol/L时,苯噻草胺破坏作物的DNA,造成药害.

目录

文摘

英文文摘

第一章绪论

1.1基因工程药物的现状及展望

1.2核酸疫苗

1.3动物转基因药物

1.4植物转基因药物

1.5小分子化合物与DNA的相互作用

1.5.1小分子化合物与DNA相互作用的模式

1.5.2小分子化合物与DNA作用的常用研究方法及其特点

1.5.3除草剂

1.6本论文的构思

1.7仪器与试剂

1.7.1仪器

1.7.2试剂

1.5缩写符号表

第二章溶栓剂基因的克隆与表达

2.1实验方法

2.1.1 pBl121-zzq亚克隆

2.1.2大肠杆菌感受态细胞的转化

2.1.3重组质粒pBl121-zzq的鉴定

2.1.4根癌农杆菌感受态细胞的转化

2.2结果与讨论

2.2.1重组质粒pBl121-zzq的构建

2.2.2大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

2.2.3重组质粒pBl121-zzq的提取

2.2.4重组质粒pBl121-zzq的酶切

2.2.5重组质粒pBl121-zzq的鉴定

2.2.6根癌农杆菌感受态细胞的制备与转化

第三章苯噻草胺与旱地植物DNA的相互作用

3.1西红柿(含玉米)DNA的提取

3.1.1实验方法

3.1.2结果与讨论

3.2狗尾草DNA的提取

3.2.1实验方法

3.2.2结果与讨论

3.3苯噻草胺与DNA相互作用的机理研究

3.3.1实验方法

3.3.2结果与讨论

3.3.3 DNA对苯噻草胺紫外吸收的影响

结论

致谢

参考文献