声明
英汉对照缩略名词对照表
摘要
引言
第一部分通过WGCNA鉴定与人膀胱癌病理相关的分子标志物
1材料与方法
1.1目的膀胱癌样本临床信息和基因数据的收集
1.2基因芯片原始数据预处理
1.3差异基因的筛选
1.4共表达网络的构建
1.5寻找有临床意义的模块
1.6蛋白互作网络
1.7功能和途径富集分析
1.8基因集合富集分析(GSEA)
2结果
2.1临床信息与基因数据的准备
2.2差异表达基因的筛选
2.3权重共表达网络构建和关键基因鉴别
2.4找枢纽基因
2.5功能和途径富集分析
2.6基因集合富集分析(GSEA)
3讨论
第二部分数据挖掘结合临床样本验证COL3A1表达与膀胱癌临床预后及病理的关系
1材料与方法
1.1一般资料
1.2枢纽基因的生存分析和效能评价
1.3组织芯片的制取
1.4免疫组化的主要试剂及实验方法
1.5实时荧光定量PCR检测
2结果
2.1枢纽基因验证
2.2免疫组化染色结果
2.3癌和癌旁组织RT-PCR检测结果
3讨论
第三部分敲低和过表达COL3A1对膀胱癌细胞系生物学行为的影响
1材料与方法
1.2 COL3A1过表达质粒构建和扩增
1.3实时荧光定量PCR检测
1.4细胞增殖实验(MTT)
1.5平板克隆形成实验
1.7肿瘤细胞划痕实验
1.8流式细胞术测周期凋亡实验
1.9 Western blot实验
2结果
2.1 RT-PCR与western blot检测EJ细胞的敲除效率
2.2 COL3A1过表达质粒构建及验证
2.3 COL3A1具有调节膀胱癌EJ细胞增殖活性的能力
2.4沉默COL3A1基因对膀胱癌肿瘤细胞迁移的影响
2.5克隆形成实验
2.6细胞划痕试验
2.7流式细胞术检测细胞周期和凋亡
2.8 Western blot实验结果
3讨论
参考文献
综述 膀胱癌相关分子特征的研究进展
攻读博士学位期间科研成果
致谢