京尼平苷对硝普钠诱导软骨细胞凋亡影响的实验研究

摘要

目的:通过提取大鼠膝关节软骨细胞原代培养,应用硝普钠(SNP)诱导软骨细胞凋亡,观察不同浓度京尼平苷干预后对软骨细胞增殖、凋亡、Ⅱ型胶原蛋白表达等的影响,探讨京尼平苷治疗骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)的可能机制。
　　方法:(1)提取大鼠膝关节软骨细胞进行原代培养,应用HE染色及Ⅱ型胶原细胞免疫化学染色法鉴定。(2)选用Ⅱ代软骨细胞,同步化培养分为空白对照组、模型对照组及不同浓度京尼平苷干预组。(3)噻唑蓝染色(MTT)法检测软骨细胞增殖。(4)流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡;NO试剂盒检测培养液中NO含量,分析NO含量变化与软骨细胞凋亡率变化两者的关系。(5)RT-PCR和Western Blot法检测II型胶原mRNA及蛋白表达水平。
　　结果:(1)成功建立正常大鼠膝关节软骨细胞原代培养体系。(2)MTT及FCM分析显示软骨细胞处于G0/G1期的百分比减少,S及G2/M期的百分比增加(P<0.05),软骨细胞凋亡率及培养液中NO含量显著降低(P<0.01)。(3)RT-PCR及Western Blot结果表明:京尼平苷干预SNP诱导软骨细胞凋亡,可促进软骨细胞II型胶原mRNA表达和蛋白合成。
　　结论:京尼平苷干预SNP诱导软骨细胞凋亡可调节细胞周期、促进细胞增殖、减少NO含量与细胞凋亡率、促进II型胶原的mRNA表达和蛋白合成,从而抑制SNP对软骨细胞的诱导凋亡作用,保护软骨细胞。本研究探讨了京尼平苷对软骨细胞增殖、凋亡及II型胶原蛋白合成的影响及可能作用机制,为开发中药制剂栀子的重要活性成分京尼平苷应用于OA治疗提供实验依据。

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英文缩略词表

引 言

材料与方法

1.1 仪器和设备

1.2 实验材料及试剂

1.3 试剂配制

1.4 实验方法

结果

第一部分 大鼠膝关节软骨细胞原代培养及鉴定

第二部分 京尼平苷对硝普钠诱导软骨细胞凋亡的影响

讨论

1 软骨细胞凋亡与 OA

2 京尼平苷应用于防治 OA 的前景

3 京尼平苷对 SNP 诱导软骨细胞凋亡的影响

小结

参考文献

综 述

后 记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著