愈痫灵颗粒剂对致痫大鼠海马神经元Ca-CaM-CaMKⅡα信号通路的影响

摘要

目的：研究以化瘀通络法为主要组方原则的愈痫灵颗粒剂对戊四氮(Pentylenetetrazol,PTZ)致痫大鼠海马组织钙离子-钙调蛋白-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-CaM-CaMKⅡα)信号通路的影响。 方法：从70只健康SD大鼠中随机抽取9只作为正常组，其余以PTZ慢性点燃造成癫痫大鼠模型，再从造模成功的大鼠中随机抽取36只，按随机原则分为4组：模型组(model)、丙戊酸钠(VPA)组、愈痫灵颗粒剂(YXL)组和尼莫地平(NIM)组，观察药物干预后点燃大鼠的行为、脑电；采用Fura-2/AM法测定海马神经元突触体内Ca2+浓度([Ca2+]i)；采用实时荧光半定量RT-PCR技术检测海马组织CaM和CaMKⅡα的mRNA表达水平：图像自动分析系统进行其吸光度扫描。　　结论：愈痫灵颗粒剂通过调控Ca2+信号转导途径中的某些靶位点，使PTZ点燃大鼠海马区Ca2+-CaM-CaMKⅡα信号途径的变化趋于正常，从而抑制神经系统的兴奋性增强，使癫痫发作得以控制。

目录

文摘

英文文摘

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引言

第一部分材料与方法

1.实验材料

1.1实验动物

1.2受试药物

1.3试剂与器材

2.实验方法

2.1实验动物分组方法

2.2癫痫模型制作方法

2.3癫痫发作异常行为观察方法

2.4实验动物给药方法

2.5脑电图描记与分析方法

2.6脑组织处理方法

2.7海马神经元突触体[Ca2+]i测定

2.8海马神经元CaM和CaMKⅡα的mRNA表达的测定

3.统计学处理方法

第二部分结果与分析

1.行为学改变

1.1惊厥潜伏期比较

1.2惊厥持续时间比较

2.脑电图改变

2.1频率变化比较

2.2波幅变化比较

3.海马神经元突触体[Ca2+]i比较(属前期研究结果)

4.实时荧光半定量RT-PCR检测结果

4.1各组海马细胞总RNA的提取结果

4.2各组海马细胞RNA定量和纯度鉴定结果

4.3各组海马细胞GAPDHmRNA表达比较

4.4海马神经元CaM mRNA表达的比较

4.5海马神经元CaMKⅡ αmRNA表达的比较

第三部分讨论

1.祖国医学有关癫痫论著读思

1.1关于病名

1.2关于病因病机及证候特点

1.3关于疾病病理演变

2.现代医学有关Ca2+信使系统与癫痫关系概要

2.1细胞Ca2+的分布和调节

2.2 Ca2+内流是癫痫病发作的基本条件

2.3 CaM和CaMKⅡα信号转导异常是癫痫发作的重要环节

3.导师学术思想撷析

3.1 临床治疗谨尊衷中参西之理

3.2愈痫灵方的创立

3.3阳性对照药物的选择

4.实验结果微探

4.1行为观察和脑电检测结果探讨

4.2海马细胞总RNA的提取结果探讨

4.3海马细胞内[Ca2+]i、CaM和CaMKⅡα的mRNA表达结果探讨

4.4总结

5.研究展望

结 论

致 谢

参考文献

附录一各组脑电图比较

附录二RT-PCR实验图片

附录三攻读硕士学位期间发表的主要学术论文