反硝化组合菌的筛选分析及两种新菌的鉴定

摘要

该文以培养基NO<,3><'->的消耗量为指标,多次筛选后得到具有高效反硝化能力的细菌HS-03和反硝化能力较强的真菌Y,R和F.将此3种真菌分别和HS-03菌组合,发现组合菌在微厌氧条件下,均有着较强的反硝化能力.通过单因素多水平实验初步确定了组合菌的最佳的脱氮培养条件,并进一步利用正交实验优化得到:组合菌种为F、Y、R真菌+HS-O3菌组合,此三组组合菌的最适反硝化作用的培养条件为:培养温度为30C,pH为8.0,C源为琥珀酸钠.关于组合菌的反硝化机理和在自然污水中生物脱氮的具体应用,将有待进一步的研究.近年来,分子生物学的快速发展及其在细菌分类学上的应用,使后者得以进一步完善.目前,16SrRNA的序列分析已成为目前研究细菌系统发育,建立细菌自然分类系统的主要依据之一.该文在常规细菌的形态分析和生理生化鉴定的基础上,进行了两种新菌的16SrRNA的序列分析,并构建了进化树.用无氮培养基分离的HS-1E菌,其常规生理生化特征与肠杆菌科的Serratia属和Klebsiella属较为接近测定了其16SrDNA序列,并进行DNA同源性分析,得到系统发育树状图.在系统进化树中HS-1E和S.marcescens最为接近,有99.0％的同源性.可判定为同一属.由于Serratia属中从未被报道过有产芽孢的菌种.因此,推测HS-1E菌可能为Serratia属的一个新种.该菌种的鉴定在细菌分类学上有着一定的意义,其产芽孢的机制有待进一步的研究.通过对菌株HS-G816SrDNA的全序列测序并进行DNA同源性分析,发现HS-G8与Arthrobacter nicotianae的16SrDNA有99.1％的同源性.由于有固氮能力的Arthrobacter属以前未见报道,因此,推测HS-G8菌可能为Arthrobacter属的一个新种.通过这一菌种的分离和鉴定,不但对开发新的固氮菌资源,也对细菌分类学的研究具有一定的意义.

目录

文摘

英文文摘

第一部分文献综述

1.生物脱氮的研究进展

1.1细菌的反硝化作用机制

1.2真菌的反硝化作用机制

1.3生物脱氮技术研究进展

2.细菌的分类学研究

2.1细菌分类鉴定方法

2.2 16SrRNA在细菌系统分类学中的应用

2.3细菌分类学新进展

2.4沙雷氏菌属(Serratia Bizio 1823)的分类特征

2.5节杆菌(Arthrobacter Com and Dimmick 1947)的分类特征

第二部分反硝化组合菌的筛选和最佳条件的研究

1.实验材料

1.1供试菌种

1.2培养基

2.实验方法

2.1酚二磺酸法测生物的脱氮能力

2.2反硝化真菌的筛选

2.3反硝化真菌－细菌组合的筛选

2.4单因素多水平实验确定反硝化组合菌的最佳培养条件

2.5正交试验确立最佳培养条件

3结果及分析

3.1细菌HS-03的反硝化作用

3.2反硝化真菌Y，R，F的筛选

3.3反硝化真菌－细菌组合的筛选

3.4单因素多水平实验

3.5正交实验确定真菌－细菌组合和反硝化最佳培养条件

4讨论

第三部分产芽孢的Serratia菌株HS-1E和一株新固氮菌HS-G8的分离和鉴定

1.实验材料

1.1供试菌株

1.2培养基

2实验方法

2.1 HS-1E和HS-G8菌株的分离培养

2.2形态结构观察及生理生化性质的测定

2.3透射电镜(TEM)及扫描电镜观察(SEM)

2.4 DNA提取及G+Cmo1％的测定

2.5 16SrRNA基因的PCR扩增

2.6 16SrDNA的全序列测定和分析

3结果及分析

3.1 HS-1E的鉴定

3.2 HS-G8的鉴定

4讨论

参考文献

在读期间已发表和待发表的论文

致谢