声明
摘要
1.1引言
1.2人类博卡病毒的分类
1.3人类博卡病毒的流行病学
1.3.1人类博卡病毒的发病率
1.3.2人类博卡病毒感染的高发季节
1.3.3人类博卡病毒的易感人群
1.3.4人类博卡病毒与其他病毒混合感染
1.4人类博卡病毒感染的临床症状
1.5人类博卡病毒的诊断方法
1.6人类博卡病毒分子生物学研究进展
1.6.1人类博卡病毒基因组序列分析
1.6.2人类博卡病毒基因功能研究进展
1.6.3人类博卡病毒转录机制研究
1.6.4人类博卡病毒的体外培养
1.7昆虫杆状病毒表达系统简介
1.8研究目的和意义
2.人类博卡病毒(mBoV1)的鉴定、基因组克隆及序列分析
2.1材料与方法
2.1.1样本的采集和预处理
2.1.2试剂、载体与菌株
2.1.3病毒DNA的提取
2.1.4 PCR鉴定
2.1.5HBoV1基因组克隆的构建
2.1.6基因组序列分析
2.2结果
2.2.2HBoV1基因组克隆的构建
2.2.3基因组序列分析
2.3讨论
3.HBoV1启动子活性分析及非结构蛋白对启动子的调控作用
3.1材料与方法
3.1.1载体、菌株与细胞系
3.1.2试剂
3.1.3引物设计
3.1.4重组载体的构建
3.1.5脂质体介导的转染
3.1.6蛋白表达的检测
3.1.7 HBov1启动子活性检测
3.1.8非结构蛋白对启动子的调控
3.2结果
3.2.1 PCR扩增产物检测
3.2.2启动子重组载体的鉴定
3.2.3非结构基因表达载体的鉴定
3.2.4蛋白表达的检测
3.2.5全长启动子活性检测
3.2.6启动子截短片段活性检测
3.2.7非结构蛋白NS1对启动子具有正调控作用
3.3讨论
4.HBoV1基因组转录、翻译机制初步研究
4.1材料与方法
4.1.1载体、菌株与细胞系
4.1.2试剂
4.1.3引物设计与合成
4.1.4细胞总RNA的提取
4.1.5 RT-PCR
4.1.6 RACE实验
4.1.7共聚焦显微镜观察NP1蛋白定位
4.1.8 Southern-blot
4.2结果
4.2.1 NP1基因转录产物的检测
4.2.2 VP基因转录产物的检测
4.2.3HBoV1转录图谱的构建
4.2.4 NP1蛋白的表达及细胞内定位
4.2.5 Southern-blot检测病毒DNA复制
4.3讨论
5.HBoV1重组杆状病毒载体的构建及应用
5.1材料与方法
5.1.1载体、菌株与细胞系
5.1.2试剂
5.1.3重组杆状病毒Bac-HBov1的构建
5.1.4重组杆状病毒Bac-Bov-EGFP的构建
5.1.7重组杆状病毒Bac-HBoV1在哺乳动物细胞中的转录
5.1.8重组杆状病毒Bac-HBoV1转导哺乳动物细胞后NP1蛋白的翻译及定位
5.2结果
5.2.1重组杆状病毒Bac-HBoV1的构建
5.2.2重组杆状病毒Bac-Bov-EGFP的构建
5.2.3重组杆状病毒Bac-Bov-EGFP转导哺乳动物细胞
5.2.4两种系统效率比较
5.2.5重组杆状病毒Bac-HBov1在哺乳动物细胞中的转录
5.2.6重组杆状病毒Bac-HBoV1转导哺乳动物细胞后NP1蛋白的翻译及定位
5.3讨论
参考文献
附录
攻读博士学位期间论文发表情况
致谢