蜱铁蛋白和抗菌多肽cDNA的克隆和分析

摘要

1、微小牛蜱铁蛋白cDNA的克隆和分析从微小牛蜱克隆到一个新的铁蛋白编码基因,cDNA全长642bp,编码区为123-639 nt,编码172个氨基酸残基,该蛋白预测的分子量为19.9kDa,等电点为4.24.预测氨基酸序列与已报道的变异革蜱、毛白钝缘蜱和蓖子硬蜱铁蛋白同源性分别为93.60％、88.37％和83.72％.该核苷酸序列在mRNA 5′-未翻译区的茎环结构存在铁应答元件,其氨基酸序列上带有典型的亚铁氧化酶中心结构的保守序列.经RT-PCR分析表明,该基因在微小牛蜱卵、幼蜱、半饱血雌蜱、饱血雌蜱和雄蜱这几个阶段均有表达.将该基因亚克隆到pET-28a(+)表达载体,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达.重组融合蛋白大小为25kDa左右,与预期大小一致.Western印迹分析表明,抗微小牛蜱唾液抗体不能识别重组表达蛋白.2、镰形扇头蜱铁蛋白cDNA的克隆和表达从镰形扇头蜱克隆到一个新的铁蛋白编码基因,cDNA全长642bp,编码区为123-639 nt,编码172个氨基酸残基,该蛋白预测的分子量为19.9kDa,等电点为4.90.预测氨基酸序列与已报道的亚洲璃眼蜱、变异革蜱、斑点钝眼蜱和微小牛蜱同源性较高,分别达到98.26％、97.09％、96.51％和95.93％.该核苷酸序列在mRNA 5′-未翻译区的茎环结构存在铁应答元件,其氨基酸序列上带有典型的亚铁氧化酶中心结构的保守序列.经RT-PCR分析表明,该基因在卵、幼蜱、饱血幼蜱、饱血若蜱、未饱血成蜱、饱血成蜱唾液腺和饱血成蜱壳几个阶段和蜱的唾液腺、壳中均有表达.将该基因亚克隆到pET-28a(+)表达载体,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达.重组融合蛋白大小为25kDa左右,与预期大小一致.3、微小牛蜱一个抗菌多肽cDNA的克隆和分析为了研究蜱与病原相互作用机制,控制蜱及蜱传疾病,本研究根据微小牛蜱巴西株近期报道的一种结构特殊的抗菌多肽核苷酸序列,从微小牛蜱中国安徽株克隆到一抗菌多肽基因,全长383 bp,编码110个氨基酸残基,该蛋白预测的分子量为12.2 kDa,等电点为4.87.经同源性比较,该微小牛蜱巴西株抗菌多肽基因有100％的相同性.经RT-PCR分析表明,该基因在微小牛蜱卵、幼蜱、半饱血雌蜱、饱血雌蜱和雄蜱这几个阶段均有表达.将该基因亚克隆到pET-28a(+)表达载体,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达.重组融合蛋白大小为15 kDa左右,与预期大小一致.体外抗菌试验表明,重组蛋白抗菌活性不明显.Western印迹分析表明,兔抗微小牛蜱唾液抗体能够识别重组表达蛋白.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明和关于论文使用授权的说明

第一章微小牛蜱和镰形扇头蜱铁蛋白cDNA的克隆和分析

第一节前言

第三节 铁蛋白研究进展

1铁蛋白的结构与功能

2铁蛋白基因分离与表达调控

3铁蛋白在组织中的表达

4蜱与昆虫铁蛋白的差异

第三节材料和方法

1材料

2方法

第四节结果与分析

第五节讨论

第二章微小牛蜱一抗菌多肽cDNA的克隆和分析

第一节前言

第二节生物抗菌多肽研究进展

1抗菌多肽的概况

2抗菌多肽的分离

3抗菌多肽的作用及抗菌机制

4抗菌多肽开发前景

第三节材料和方法

1材料

2方法

第四节结果与分析

第五节讨论

小结

参考文献

附录

符号说明

致谢

作者简介及硕士期间发表的论文