大豆猝死综合症病原菌的土壤分离与分子检测技术的研究

摘要

本研究为防止大豆猝死综合症病菌随进口的大豆传入中国，保护我国的大豆生产，确立了大豆猝死综合症病菌的检测技术，并应用该技术对从几个口岸采集的土样进行了检测。 采用PCNB选择性培养基进行土壤分离，SDS病原菌在PCNB上产生圆形白色菌落，菌落中心微隆，淡黄色，粉笔末状。将菌落转移至PDA培养基上继续培养，产生蓝色不规则菌落，气生菌丝少，这些菌落的特征可以作为鉴别SDS病原菌的一个重要指标。在显微镜下观察它们的孢子形态，F.virguliforme、F.tucumaniae和它们的近似种的差别很小，都能产生镰刀形的，有2-3个分隔的大分生孢子。 针对翻译延长因子(EF-1α)基因上的3个SNP(单核苷酸多态性)位点，参照引物设计原则和等位基因特异引物(allele-specificprimer，ASP)的要求设计筛选了一对引物Fsg-α-1/6，能特异地扩增F.virguliforme，产生327bp的电泳条带。另外根据ITS区序列设计了一对通用引物Fu1/2，能扩增F.virguliforme和F.phaseoli，产生452bp的电泳条带。并且在传统的AS-PCR基础上进行改进，引入Fu1/2作为阳性质控引物，将ASP的特异性与双重PCR的严谨性相结合，使鉴定的结果更加稳定可靠。另外在ITS2区设计了一对特异性引物，能特异性地扩增F.virguliforme，产生650bp左右的条带，进一步完善了SDS病原菌北美种的检测技术。 最后，应用该技术对从各口岸采集的土样进行检测，没有发现SDS病原菌。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

第二章大豆猝死综合症病原菌的土壤分离

第三章大豆猝死综合症病原菌的分子检测

第四章结论和讨论

参考文献

致谢

作者简历