春石斛兰品种的倍性鉴定及RAPD分子遗传图谱的构建

摘要

本研究采用染色体计数和流式细胞仪测定两种方法，对春石斛品种的倍性进行了鉴定，并以044(.Dendrobium L,ucky Gal‘Emito’)(母本)与051(D.Fantasy‘Crown’)(父本)的F<,1>代90株为作图材料，利用RAPD标记，围绕春石斛分子遗传图谱的构建，进行了春石斛RAPD反应体系优化和RAPD标记分离分析等方面研究，并初步最终构建了春石斛分子遗传图谱。 主要结果如下： 1、春石斛的倍性鉴定 利用DNA流式细胞仪测定法鉴定了53个由日本引进的春石斛栽培品种和26个国产原生种的染色体倍性。结果表明，待测品种植株中有二倍体、三倍体及二倍体加四倍体、三倍体加六倍体和四倍体加八倍体等嵌合体。利用染色体制片法鉴定了17个栽培种和4个原生种的倍性，待测品种植株中不仅有二倍体、三倍体和四倍体，而且还可能有二倍体加四倍体的嵌合体。比较这两种植株倍性鉴定方法，流式细胞仪光度术测定细胞核DNA含量，试样制备简单，测量快速，精度高，因此是进行倍性鉴定的理想方法之一，其鉴定结果与染色体计数结果有所不同，但是可以作为染色体计数方法的有效参照。染色体计数法虽然操作过程比较繁琐，但却是最可靠、最直接的鉴定方法。 2、作图群体RAPD多态性分析 从420个RAPD随机引物中筛选获得在双亲间存在多态性的引物90个，多态性比例为21.4％。用筛选出的90个随机引物对F<,1>群体进行多态性分析，共获得稳定的多态性带型215个。经卡方检测，获得的215个RAPD多态性位点中，有122个RAPD标记符合孟德尔遗传规律(1:1)，可用于作图。 3、春石斛分子遗传图谱的构建 利用RAPD标记构建了一张包含9个连锁群、由121个标记位点组成的春石斛分子遗传图谱，图谱总长度6568.7cm，标记问平均距离为50.11cm，连锁群长度变动在128.8cm～1043.0cm之间。标记最多的连锁群有21个标记，最少的有3个。

目录

声明

摘要

1前言

1.1石斛兰染色体分析及倍性研究进展

1.2花卉RAPD分子标记遗传图谱构建研究进展

1.3石斛兰分子标记研究进展

1.4本论文的研究目的与意义

2材料与方法

2.1材料、试剂与仪器

2.1.1倍性鉴定试验材料、试剂与仪器

2.1.2 RAPD分子标记试验材料

2.2方法

2.2.1亲本倍性测定

2.2.2利用RAPD分子标记构建遗传图谱

3结果与分析

3.1石斛兰倍性鉴定结果

3.1.1取材时间

3.1.2高温酸解时间

3.1.3倍性鉴定结果

3.2石斛兰的RAPD分析

3.2.1 RAPD反应体系的优化

3.2.2随机引物筛选

3.2.3亲本的RAPD多态性分析

3.2.4 RAPD标记的偏分离分析

3.2.5异常分离

3.2.6春石斛RAPD标记连锁图谱的构建

4讨论

4.1制片方法的探讨

4.2倍性鉴定结果讨论

4.3影响RAPD稳定性的试验因素

4.4影响连锁图谱构建的因素分析

4.4.1作图群体亲本的选择

4.4.2构图群体样本数的大小

4.4.3父母本多态性遗传分析

4.4.4连锁图谱分析

参考文献

致谢