中国原产完全甜柿‘小果甜柿’DkMYBa基因的克隆和分析

摘要

迄今有关中国原产完全甜柿甜涩性状遗传规律的研究表明，中国甜柿自然脱涩可能为单宁生物合成的调控机制不同于日本甜柿，但其细节尚不清楚。本试验以‘小果甜柿’（Diospyros kald Thunb．）为试材，克隆MYB转录因子基因的cDNA序列，并进行了功能预测和表达分析。
　　 主要实验结果如下：
　　 1．通过同源克隆法克隆得到的MYB转录因子基因，通过蛋白质翻译比对，确定含有植物MYB转录因子基因共有的典型特征：具有两个典型的R2R3区域，有大多数MYB转录因子基因与bHLH结合的位点，含有两个以上的色氨酸族，其后有一些保守的氨基酸，共同形成螺旋-折叠-螺旋结构，与其它MYB转录因子基因蛋白质序列R2R3区域的一致性较高，其中同葡萄MYB转录因子基因的蛋白质序列一致性高达85％。DkMYBα氨基酸全序列比对，与棉花和杨树MYB转录因子基因序列相似性最高。
　　 2．DkMYBα转录因子基因的初步表达分析结果表明，其在5月到7月中旬表达，8月11日之后表达停止；与中国原产甜柿种质的单宁生物合成在5月到7月中旬生成量增加的趋势相符。但DkMYBA基因是否参与柿单宁生物合成的调控有待即进一步研究证实。

目录

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论文说明：缩略词表

声明

第一章前言

1.1课题的提出

1.2前人研究进展

1.2.1植物MYB转录因子的研究进展

1.2.2利用MYB基因进行植物次生代谢遗传改良工程的研究进展

1.2.3柿MYB转录因子研究概况

1.3本课题研究内容

第二章材料与方法

2.1材料

2.2方法

2.2.1柿总RNA的提取和检测

2.2.2 cDNA合成

2.2.3 PCR扩增

2.2.4 PCR产物检测及纯化

2.2.5 PCR产物克隆

2.2.6转化大肠杆菌及阳性克隆增值

2.2.7测序、生物信息学分析

2.2.8 DkMYBα基因表达检测

第三章结果与分析

3.1 R2R3结构域的克隆

3.2两端克隆

3.2.1 3’端的克隆

3.2.2 5’端的克隆

3.3生物信息学分析

3.3.1 R2R3区域的同源性分析

3.3.2 DkMYBA基因同源性分析

3.3.3 DkMYBa基因在‘小果甜柿’上的表达

第四章讨论

4.1‘小果甜柿’DkMYBa序列克隆的简并引物设计

4.2‘小果甜柿’DkMYBa基因两端序列克隆方法的筛选

4.3 DkMYBa基因表达特性的初步探讨

参考文献

致谢