青鱼肠道出血病病原菌的分离鉴定与疫苗的初步研究

摘要

嗜水气单胞菌感染引起的水生动物细菌性出血病,是危害水生动物种类最多、影响区域最广、流行季节最长、发病率和死亡率高、造成经济损失最严重的一种传染性疾病。
　　 2009年7月,湖北省荆州市某青鱼养殖示范区域暴发严重的肠道出血病。笔者从患典型肠道出血病的青鱼肝脏中分离到优势菌1株BCB01,人工腹腔注射感染试验可复制出与自然发病相似的症状。单克隆菌落的Biolog系统鉴定结果表明,菌株BCB01为嗜水气单胞菌。细菌16S rRNA基因测序与系统进化树分析结果表明,菌株BCB01与嗜水气单胞菌(EF645799)的亲缘关系最近,其相似性为99％。药物敏感性试验结果显示,该菌株对大多数试验药物敏感,其中对复达欣、头孢西丁、先锋必等11种药物的高度敏感。
　　 将福尔马林灭活的嗜水气单胞菌(F-AH)、菌体外膜蛋白(OMP)和菌体脂多糖(LPS)作为免疫原,分别免疫健康青鱼。在免疫1、2、4、7、14、21、28d后分别从每组中随机各取5尾试验鱼,尾静脉采血,进行外周血的血细胞计数和白细胞分类计数,测定细胞吞噬活性和抗体效价。结果表明:3种免疫原均可诱导红细胞和白细胞数量增加,并引起各种白细胞分类百分比变化,提高吞噬活性和抗体效价；免疫应答早期(第1周)主要是红细胞、单核细胞和中性粒细胞数量明显增加,吞噬细胞的吞噬活性迅速提高,吞噬百分比(PP)和吞噬指数(PI)第4天达峰值:F-AH组、OMP组和LPS组的PP、PI值依次分别为39.84％、46.53％、41.59％;3.94、4.26、3.77；随后则是淋巴细胞大量增殖,第21天淋巴细胞和抗体效价达峰值:F-AH组、OMP组和LPS组的抗体效价分别为1:426.67、1:341.33和1:213.33。免疫28d后活菌攻毒的结果表明,OMP组的免疫保护率为75％；LPS组为67.8％,均明显优于F-AH组(50％)。可见3种免疫原均能通过促进青鱼血细胞增殖、提高吞噬细胞的吞噬活性、产生特异性抗体等方式增强机体的免疫保护力。