甘露寡糖对草鱼肠道粘液粘附作用及免疫相关基因表达的调节

摘要

本研究以草鱼（Ctenopharyngodon idellus）为试验对象，研究了甘露寡糖对草鱼肠道粘液粘附作用及免疫相关基因表达的影响。
　　 1.在研究甘露寡糖对草鱼肠道粘液粘附作用的影响实验中，将大小基本一致的健康草鱼随机分为2组，即实验组和对照组，实验组为基础饲料中添加0.2％的甘露寡糖(MOS)组，对照组组为基础饲料(CON)组。试验鱼分别投喂对应饲料48 d，在实验结束时刮取草鱼前肠粘液进行处理，提取肠粘蛋白，将一定浓度的肠粘蛋白与细菌进行孵育固定、革兰染色，在油镜下对粘附细菌进行观察计数。研究甘露寡糖对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌对草鱼肠粘液粘附作用的影响。结果显示，在饲料中添加甘露寡糖后，草鱼前肠粘液蛋白对嗜水气单胞菌和枯草芽孢杆菌的粘附数量有显著影响(P＜0.05)，对大肠杆菌和植物乳杆菌的粘附数量没有显著影响(P＞0.05)。甘露寡糖提高了枯草芽孢杆菌和嗜水气单胞菌对草鱼前肠肠粘液的粘附能力。
　　 2.在饲料中添加0.2％甘露寡糖，饲养草鱼28 d后草鱼经腹腔注射3.2×106cell/mL嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila，Ah)0.1 mL，在注射细菌后24 h、48 h、72 h、96 h和120 h，分别取草鱼头肾、脾、肝和后肠。利用荧光定量PCR分析甘露寡糖对感染嗜水气单胞菌后草鱼头肾、脾和肝中IL-1β和IL-10及后肠中IL-1β、IL-10、IFN和TLR4表达的影响。结果显示，在草鱼头肾中，MOS/I（0.2％甘露寡糖+注射Ah）组IL-1β的表达在注射嗜水气单胞菌后48 h显著高于CON/I(基础饲料+注射Ah)组;MOS/I组中1L-10的表达在注射嗜水气单胞菌72 h显著高于CON/I组，在96 h时显著低于CON/I组。在草鱼脾脏中，MOS/I组IL-1β的表达在注射细菌后72 h和96 h均显著低于CON/I组;IL-10的表达在注射细菌后48 h和96 h均显著低于CON/I组。在草鱼肝脏中，MOS/I组IL-1β和IL-10的表达在注射细菌后48 h显著高于CON/I组，但在注射后72 h和96 h时该2种基因的表达降低并低于CON/I组。在草鱼的后肠中，注射细菌24 h后CON/I组鱼体后肠中IL-1β的表达量显著高于MOS/I组，CON/I组草鱼注射嗜水气单胞菌后IL-1β的表达逐渐升高，MOS/I组IL-1β的表达相对平稳;MOS/I组IL-10在注射细菌后72 h降低。MOS/I组中IFN的表达量均显著高于CON/I组（除72 h）。MOS/I组中TLR4的表达在注射细菌后48h和72 h显著高于CON/I组。表明甘露寡糖在鱼体感染嗜水气单胞菌时能快速调节草鱼各组织中免疫相关基因的表达量，增强鱼体抵抗力。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．1 功能性寡糖的概述

1．2 功能性寡糖的作用与机制

1．3 甘露寡糖

1．4 甘露寡糖在水产动物上的研究进展

1．4．1 促生长作用

1．4．2 肠健康与免疫

1．5 鱼类肠粘膜相关淋巴系统

1．6 本研究的目的与意义

第二章 甘露寡糖对草鱼肠粘液粘附能力的影响

2．1 材料与方法

2．1．1 菌株

2．1．2 供试鱼及试验条件

2．1．3 饲料配方

2．1．4 肠粘液制备

2．1．5 菌株的复苏、菌浓度的测定

2．1．6 粘附实验

2．1．7 观察计数

2．1．8 数据处理

2．2 结果与分析

2．2．1 细菌的粘附能力差异

2．2．2 甘露寡糖对肠道粘液粘附能力的影响

2．3 讨论

第三章 甘露寡糖对草鱼感染嗜水气单胞菌后免疫相关基因表达的调节

3．1 材料与方法

3．1．1 供试鱼及试验条件

3．1．2 饲料配方

3．1．3 试验设计

3．1．4 样品收集

3．1．5 提取组织总RNA

3．1．6 RNA的定性与定量分析

3．1．7 制备cDNA

3．1．8 引物设计和PCR反应

3．1．9 数据分析

3．2 结果与分析

3．2．1 肝脏、脾脏和肾脏中IL-10和IL-1β的表达

3．2．2 后肠中IL-1β、IL-10、IFN和TLR4的表达

3．3 讨论

3．3．1 甘露寡糖对肝脏、脾脏和肾脏中IL-10和IL-1β表达的调节

3．3．2 甘露寡糖对后肠中IL-1β、IL-10、IFN和TLR4表达的调节

参考文献

附录1 培养基的配制

附录2 硕士期间发表的论文

致谢