盾壳霉与核盘菌互作过程中分泌蛋白的预测分析及CMA04837基因功能初步研究

摘要

核盘菌（Sclerotini sclerotiorum）是一种重要的植物病原真菌，分布广、危害大、防治困难。盾壳霉（Coniothyrium minitans）是该病原菌的重寄生真菌，可以有效降低核盘菌菌核的形成与萌发，在菌核病的生物防治方面具有较大的应用潜力。进行盾壳霉和核盘菌互作研究有利于深入探讨盾壳霉对核盘菌的生防机理，为利用盾壳霉防治菌核病提供理论指导和依据。
　　 本研究利用SgnalP结合THMHH对盾壳霉的预测蛋白进行信号肽分析，筛选出具有信号肽的蛋白。10920个预测蛋白中1014个具有信号肽，为可能的分泌蛋白。其中有74个预测蛋白半胱氨酸含量超过4％。参考盾壳霉与核盘菌、盾壳霉与灰葡萄孢互作的表达谱，其中31个基因在与核盘菌互作过程中有表达。经过blastp比对发现其中5个预测蛋白具有膜形成或膜功能相关的domain，暗示盾壳霉与核盘菌互作过程中的细胞膜功能有很大作用;4个预测蛋白具有多糖结合domain，推测他们具有多糖分解活性;4个预测蛋白与抗真菌蛋白、病程相关蛋白、植物抗性蛋白有很高的同源性。选取其中与维多利亚长蠕孢属抗真菌蛋白Victoriocin同源性较高的预测分泌蛋白CMA04837，通过基因超量表达进行了功能验证。超表达转化子表现出了黑色素减少、菌丝生长密集、气生菌丝增多、产孢能力下降的现象。暗示CMA04837基因在盾壳霉生长发育过程中存在一定作用。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．核盘菌研究进展

1．1 核盘菌分类地位及其危害

1．2 核盘菌病害症状以及病害循环

1．3 油菜菌核病的防治措施

2．盾壳霉研究进展

2．1 盾壳霉生物学特性与生态学

2．2 盾壳霉对核盘菌生物防治机制

2．3 盾壳霉在核盘菌防治中的应用

2．4 真菌互作的研究

3．真菌分泌蛋白研究方法

4．选题的目的和意义

第二章 盾壳霉分泌蛋白预测与初步分析

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 盾壳霉ZS-1分泌蛋白预测

2．2 信号肽长度分析

2．3 信号肽氨基酸组成统计

2．4 信号肽C区特征

2．5 功能预测

3 讨论

第三章 CMA04837基因功能初步研究

1．材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

2 结果与分析

2．1 CMA04837基因序列的分析

2．2 CMA04837基因表达检测

2．3 超表达载体的构建和验证

2．4 超表达转化子的筛选及验证

2．5 CMA04837超表达转化子形态特征

3．讨论

结论和展望

参考文献

致谢