50株丹毒丝菌的鉴定及致病性和耐药性分析

摘要

丹毒丝菌是一种兼性厌氧、无芽孢、无鞭毛的革兰氏阳性菌。能引起猪的慢性关节炎和心内膜炎，并感染多种其他动物。本实验室从华中农业大学兽医院获取50株疑似丹毒丝菌，对其进行了鉴定、分型、致病性试验和耐药性分析。
　　本研究主要内容包括：⑴从2012年至2013年上半年，华中农业大学兽医院工作人员共从7个省市送检的病料中分离到50株疑似丹毒丝菌，我们通过细菌学实验及 PCR扩增丹毒丝菌16SrRNA特异性基因序列进行鉴定，结果证实50株疑似丹毒丝菌，全部为丹毒丝菌。其中红斑丹毒丝菌的检出率为86％，血清型13的丹毒丝菌检出率为14%，扁桃体丹毒丝菌和血清型18的丹毒丝菌检出率都为0。⑵用PCR扩增了50株丹毒丝菌的7个毒力基因（Capsular A、Capsular B、Capsular C、rspA、rspB、SpaA、sialidase），凝胶电泳检测结果显示，有88%的丹毒丝菌拥有所有的毒力基因，而缺乏SpaA毒力基因的丹毒丝菌是6%，缺乏rspA、rspB、和sialidase毒力基因的丹毒丝菌都为2%。另外，根据文献设计了13个疑似丹毒丝菌毒力基因引物，其中与神经氨酸酶相关的有2个，与磷脂酶相关的9个，与黏附素相关的1个，与spa相关的1个， PCR扩增结果显示有42%的菌株同时拥有这13个基因，36%的菌株有其中12个基因，18%的菌株有11个毒力基因，4%的菌株有其中9个基因。⑶用灭活的血清型标准菌株 CVCC138（1a）、CVCC139（1b）、CVCC140（2）、CVCC141（2a）、CVCC142（2b）与佐剂充分乳化后，免疫6月龄的雄性普通级家兔制备标准血清，再利用琼脂扩散实验鉴定50株丹毒丝菌的血清型，结果显示血清型1a型检出率为28%，1b型16%，2a型24%，2b型6%，有12%的菌株不属于这4种血清型。⑷采用微量肉汤稀释法测定50株丹毒丝菌对16种抗生素的MIC值，其中对四环素的耐药率最高，达到76%，其次是左氧氟沙星26%，而对头孢噻肟、氨苄西林和红霉素表现出100%敏感。因其他药物未给出药物敏感参考标准，故仅列出其MIC50值，丹毒丝菌对某种抗生素的 MIC50值越大，说明其对此种药物越不敏感。其中头孢唑林、卡那霉素和阿米卡星的 MIC50达到512μg/mL，庆大霉素的 MIC50为256μg/mL，其次是万古霉素和四环素128μg/mL，最小的是呋喃妥因和强力霉素32μg/mL。

目录

声明

缩略语表（Abbreviation）

1 文献综述

1.1 丹毒丝菌概述

1.2 丹毒丝菌的分类及血清型

1.3 丹毒丝菌的毒力因子

1.4 丹毒丝菌的分离鉴定

1.5 预防和控制

2 目的和意义

3 材料与方法

3.1材料

3.2方法

4 结果与分析

4.1细菌分离纯化结果

4. 2革兰氏染色镜检结果

4.3丹毒丝菌特异性16SrRNA基因扩增结果

4.4毒力基因检测结果

4.5小鼠致病性结果

4.6 血清型分型结果

4.7 PFGE结果

4.8 MIC试验结果

5 讨论

6 结论

参考文献

附录1.

附录2.

附录3.

致谢