疑似桃流胶病菌N2的分类鉴定与致病性测定

摘要

桃(Prunus persica L．)在我国广泛种植，桃流胶病(Peach tree gummosis)是桃树的主要病害之一，侵染成年桃树和幼龄桃树，主要引起树干、主枝流胶，阻碍树体的生长发育，降低果实的品质和产量。葡萄座腔菌属真菌(Botryosphaeria)是造成桃流胶的主要病原菌，已公开报道的湖北省的桃流胶病菌有 Fusicoccum aesculi、Lasiodiplodia theobromae和Diplodia seriata。本研究以华中农业大学果树试验基地捕捉到的病原菌孢子和五年生‘春雪’桃为研究材料，对所捕捉到的孢子进行分离纯化培养得到 N2菌株，通过观察菌落和分生孢子形态，再结合系统发育分析和致病性测定，对N2菌株进行鉴定。主要结果如下：
　　1. N2菌株的菌落和分生孢子形态与已知的桃流胶病菌F. aesculi、L．theobromae和D．seriata不完全相同。N2菌落整体呈不规则圆形，培养初期菌丝块周围生长较慢，菌丝还未长满培养皿之前呈环形，气生菌丝为白色絮状，后期菌落逐渐变为墨绿色直至黑色，菌丝发达，培养20 d之后可在菌落中观察到散生或聚生的黑色颗粒状分生孢子器。显微镜下观察分生孢子为无色透明、初期无隔、近椭圆形至梭形状，一端近尖或两端钝圆，在老熟时变为1-2分隔的褐色孢子，大小为11.2-18.8（13.7）μm×4.9-9.9（6.1）μm，长宽比为2.3±0.2。菌株在13-33℃均能生长，最适生长温度为28℃。初步推断N2为葡萄座腔菌属的Neofusicoccum parvum。
　　2.通过分子生物学手段，用特异性引物对ITSl/ITS4、EF-728F/EF-986R、Bt2a/Bt2b对ITS、EF1-ɑ、β-tubulin三个基因序列进行扩增和测序，利用测序数据和PAUR*4.0软件构建出N2菌株的系统发育树，鉴定其属于N．parvum。
　　3.离体接种和田间接种N2菌株，均能在枝条上观察到病斑和流胶现象，对病健交界处的组织进行病原菌的再分离，得到其纯培养后，可得到性状与 N2菌株相同的菌，根据柯赫氏法则确定N2菌株属于桃流胶病的致病菌。离体接种N2菌株到‘春雪’桃当年生木质化新梢，接种第2d出现明显的椭圆形至圆形的红褐色凹陷病斑，发病率100％，病斑平均长度为6.88 mm，接种第7 d病斑平均长度为8.04 mm，部分接种点出现流胶现象，而对照无症状。田间接种‘春雪’桃一、二、三年生枝条出现明显病症的时间较长，但在接种两周后发现一年生枝条有褐色病斑和流胶症状。

目录

声明

缩略词表

1 前言

1.1 问题的提出

1.2 桃流胶病研究进展

1.3 病原菌孢子捕捉

1.4 病原菌分离与鉴定

1.5 病原菌致病性测定

1.6 Neofusicoccum parvum的形态特征及导致的植物病害

1.7 研究目的及意义

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.2 孢子捕捉仪的工作原理

2.3 病原菌孢子的培养纯化和检测

2.4 N2菌株的形态学鉴定

2.5 菌株的纯化及分生孢子的诱导

2.6 N2菌株的系统发育分析

2.7 N2菌株的致病性测定

2.8 温度对N2菌株生长的影响

2.9 数据统计及分析

3 结果与分析

3.1 N2菌株的鉴定结果

3.2 N2菌株致病性测定

3.3 温度对N2菌株生长的影响

4 结论

4.1 N2菌株的鉴定结果

4.2 N2菌株的致病性测定

4.3 N2菌株的最适生长温度

5 讨论

5.1 Neofusicoccum parvum的鉴定

5.2 Neofusicoccum parvum的诱导产孢方法

5.3 Neofusicoccum parvum 的致病性测定方法

参考文献

致谢

附录Ⅰ：课题资助项目