副猪嗜血杆菌感染对于猪巨噬细胞分化及组织器官病理变化的作用研究

摘要

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)是猪中的一种机会致病菌，感染后引起格拉瑟氏病，具体表现为血纤维蛋白性心包炎，脑膜炎和多发性关节炎。目前Hps的致病的具体分子机制尚不清楚，有研究报道：Hps感染后显著影响猪肺泡巨噬细胞中转录组变化，并且在Hps感染过程中巨噬细胞起到重要作用，无论是通过肺部感染或是通过上皮细胞入侵机体Hps均会与巨噬细胞相遇。因此本试验选择了巨噬细胞作为研究对象，推测在感染的过程中Hps会诱导巨噬细胞向M2极化导致免疫抑制。
　　本研究分为三个部分：第一部分进行了禁食初乳(colostrum-deprived, CD)仔猪的饲养和Hps的攻毒，选取了10头通城仔猪分为两组，其中感染组包含6头仔猪对照组包含4头仔猪。在饲养中对感染前后 CD仔猪体温、体重的变化进行了检测，同时对感染后的外周血血常规进行了分析。第二部分于感染Hps后第三天屠宰并采集心、脑、肺、脾脏等组织的样品，并提取RNA。在提取RNA后根据人和小鼠上的相关研究，选取了包括ABCA1基因在内的28个与巨噬细胞选择分化相关的基因，在肺脏中进行了qPCR验证，然后在肺泡巨噬细胞中，用IHC对qPCR结果进行蛋白水平的验证。希望通过本次研究验证Hps感染是否会引起巨噬细胞的选择性分化和关键基因ABCA1表达的变化。第三部分在不同猪群中对G/T无义突变的存在进行了鉴定。生物信息学分析显示，关键基因ABCA1第21外显子上存在G/T无义突变，因此本试验利用不同猪种群体样本对TAA突变个体进行了筛查，希望通过找出突变个体从而找到抗Hps感染的个体。

目录

声明

缩略词表（ABBREVIATIONS）

1 前言

1.1 研究问题的由来

1.2 Hps相关研究

1.3 巨噬细胞相关研究

1.4 ABCA1基因相关研究

2 材料与方法

2.1 本研究的技术路线

2.2 本研究的材料

2.3 方法

3 实验结果

3.1 Hps培养和CFU计数

3.2 Hps攻毒

3.3 M1/M2标记基因qPCR结果

3.4 肺泡巨噬细胞IHC

3.5 感染Hps前后血常规检测

3.6 ABCA1基因G/T无义突变检测结果

3.7 ABCA1基因的组织表达谱特征分析

4 讨论

4.1 Hps感染后对于巨噬细胞分化的影响

4.2 Hps感染对ABCA1影响

4.3 ABCA1基因G/T无义突变的鉴定

4.4 CD仔猪实验模型的建立

5 小结

5.1 本研究的主要结论

5.2 本研究的创新点与特点

5.3 本研究的不足和进一步工作建议

参考文献

致谢