猪源沙门菌质粒介导的广谱头孢菌素和黏菌素耐药性研究

目录

声明

摘要

缩略语表(Abbreviation)

1．前言

1．1沙门菌的公共卫生学意义

1．1．1食源性疾病的负担

1．1．2沙门菌在食源性疾病中的地位

1．2沙门菌及其多重耐药性

1．2．1细菌的耐药性负担及耐药机制

1．2．2沙门菌多重耐药情况

1．3质粒介导的耐药性及其分型

1．3．1质粒介导的耐药性及其电泳图谱

1．3．2质粒的复制子类型

1．4广谱头孢菌素和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)

1．4．1头孢菌素的研究进展及其耐药性

1．4．2超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的分类

1．5多黏菌素和mcr-1基因

1．5．1多黏菌素的分类和应用

1．5．2 mcr-1基因的发现和流行

1．6研究目的与意义

2．材料与方法

2．1材料

2．1．1菌株和载体

2．1．2所用培养基及试剂

2．1．3主要仪器和设备

2．1．4培养基、抗生素及相关溶液的配制

2．2方法

2．2．1沙门菌的复苏与鉴定

2．2．2头孢噻肟耐药沙门菌的筛选

2．2．3沙门菌药物敏感性的测定

2．2．4质粒的提取和分型

2．2．5沙门菌ESBLs基因的检测

2．2．6 ESBLs基因的接合转移试验

2．2．7沙门菌mcr-1基因的检测

2．2．8 mcr-1基因的接合转移试验

2．2．9接合转移频率的计算

2．2．10接合子的药物敏感性试验

2．2．12重组载体的构建和鉴定

2．2．13重组菌黏菌素的药物敏感性试验

3．结果与分析

3．1多重耐药沙门菌的鉴定与耐药情况

3．2头孢噻肟耐药沙门菌的筛选

3．3耐药菌最小抑菌浓度(MIC)的测定

3．4质粒的电泳图谱和复制子类型

3．4．1质粒的电泳图谱

3．4．2质粒的复制子类型

3．5沙门菌ESBLs基因的检测

3．6 CTX-M耐药基因的分型和测序

3．6．1 CTX-M基因分组的PCR检测

3．6．2 CTX-M基因亚型的测序比对

3．7 ESBLs基因的接合转移

3．7．1 ESBLs接合子的筛选

3．7．2 ESBLs接合子的PCR验证

3．8 mcr-1基因的检测

3．9mrc-1基因的接合转移

3．9．2 mcr-1接合子的PCR验证

3．1 0 mcr-1接合子的药物敏感性试验

3．11 mcr-1接合子转移频率的计算

3．12 mcr-1接合子质粒的提取

3．13重组质粒的构建和鉴定

3．13．1目的基因的扩增

3．13．2重组质粒的鉴定

3．13．3重组质粒的双酶切

3．13．4重组菌的药物敏感性试验

4．讨论

4．1多重耐药猪源沙门菌的公共卫生学意义

4．2沙门菌的耐药表型和耐药基因型

4．3耐药基因的转移性分析

4．4质粒的电泳图谱和不相容群类型

4．5后期研究展望

5．结论

参考文献

附录

致谢