声明
摘要
1前言
1．1豆科植物-根瘤菌共生固氮的重要意义
1．2豆科结瘤的生物学过程
1．2．1豆科植物-根瘤菌共生关系的建立
1．2．2根瘤的器官形成过程
1．2．3根瘤的发育及共生体固氮能力的形成
1．3结瘤调控分子机制研究进展
1．3．1结瘤因子信号通路
1．3．2结瘤自调控信号通路
1．4 miRl72c-NNC1与豆科结瘤
1．4．1 microRNA与豆科结瘤
1．4．2 miR172c-NNC1模块作用机制
1．5植物激素对侧根及根瘤形成的调控作用
1．6 BRs及其激活的信号通路对豆科结瘤的调控
1．6．1 BRs及其生物合成
1．6．2 BR信号转导途径
1．6．3 BES1／BZR1及其参与的植物调控网络
1．6．4 BRs与豆科结瘤
1．7研究目的及意义
2材料及方法
2．1实验材料
2．1．1植物材料
2．1．2菌株
2．1．3载体质粒
2．2实验方法
2．2．1 CTAB法提取大豆基因组DNA
2．2．2植物材料总RNA提取
2．2．3反转录cDNA合成
2．2．4 Real-time PCR检测基因表达
2．2．5载体构建
2．2．6农杆菌感受态制备及质粒转化实验
2．2．7蛋白质互作实验
2．2．8 BR处理大豆结瘤表型鉴定
2．2．9 GmBEHL1在大豆结瘤中的功能分析
2．2．10 GmBEHL1与AtBEH1的功能同源性分析
2．2．11 GmBEHL1结合miR172c启动子序列的验证
2．2．12统计学分析方法
3．结果与分析
3．1 GmBEHL1与大豆结瘤负调因子NNC1相互作用
3．2 BRs负向调控大豆结瘤
3．2．1大豆对BRs处理敏感性检测
3．2．2外施BRs使大豆结瘤数目减少
3．2．3 BR负向调控结瘤信号通路Marker基因表达
3．3 GmBEHL1在大豆结瘤过程中的生物学功能
3．3．1 GmBEHL1在大豆毛状根转化体系中负向调控结瘤
3．3．2 GmBEHL1负向调控结瘤信号通路Marker基因的表达
3．3．3 GmBEHL1在大豆中呈现动态时空表达模式
3．4 GmBEHL1是BES1／BZR1家族功能同源蛋白
3．4．1进化树构建及氨基酸序列比对
3．4．2 GmBEHL1定位于细胞核和细胞质中
3．4．3 GmBEHL1具有体外DNA结合功能
3．4．4 GmBEHL1与BR信号通路激酶蛋白GmBIN2相互作用
3．4．5 GmBEHL1调控大豆中BR合成基因表达
3．5 GmBEHL1调控大豆结瘤的分子机制探究
3．5．1 GmBEHL1转录调控下游潜在靶基因
3．5．2 GmBEHL1能够直接结合miR172c启动子
3．5．3 GmBEHL1抑制miR172c启动子转录活性
4讨论与展望
参考文献
附录
致谢
