声明
摘要
缩略语表
1文献综述
1．1叶酸背景介绍
1．1．1叶酸的化学结构
1．1．2叶酸的生物合成
1．1．3叶酸的多聚谷氨酸化
1．1．4叶酸降解
1．1．5叶酸的分布
1．1．6叶酸的功能
1．1．7叶酸缺乏
1．1．8叶酸的补充
1．1．9叶酸强化
1．1．10 5-F-THF介绍
1．2关联分析
1．2．1关联分析与连锁分析的比较
1．2．2连锁不平衡
1．2．3LD的度量
1．2．4LD的影响因素
1．2．5关联分析策略与实施
1．2．6关联分析的局限性
1．2．7植物关联分析研究进展
1．3研究目的和意义
2材料与方法
2．1材料
2．1．1植物材料
2．1．2基因型
2．1．3菌株和质粒
2．2玉米干粉叶酸的提取
2．2．1叶酸提取液的配制
2．2．2玉米千粉叶酸提取
2．3遗传转化及转基因植株鉴定
2．3．1基因扩增和测序
2．3．2KOD Plus扩增体系和反应条件
2．3．3凝胶回收
2．3．4LB培养基的配方
2．3．5连接与转化
2．3．6质粒小量提取
2．3．7拟南芥过表达载体的构建
2．3．8拟南芥转基因及DNA提取鉴定
2．3．9玉米中GFT1的过表达和RNAi
2．4关联分析
2．4．1全基因组关联分析
2．4．2候选基因关联分析
2．4．3条件关联分析
2．4．4重测序和序列分析
2．4．5连锁不平衡分析
2．4．6连锁定位分析
2．4．7eQTL定位
2．5基因表达分析
2．5．1RNA提取
2．5．2反转录
2．5．3表达模式分析
2．6蛋白表达纯化
2．6．1基因的克隆和异源表达载体构建
2．6．2SDS-PAGE凝胶电泳
2．6．3试表达
2．6．4大量表达
2．6．5蛋白电泳缓冲液的配制
2．6．6蛋白凝胶染色液的配制
2．6．7蛋白凝胶脱色液的配制
2．7亚细胞定位
2．7．1溶液的配制
2．7．2原生质体制备和转化
2．8数据分析软件
3结果与分析
3．25-F-THF含量全基因关联分析
3．35-F-THF含量候选基因关联
3．4条件关联分析确认更多关联位点
3．5玉米GFT1的相关信息
3．6eQTL定位
3．7连锁分析
3．8单倍型分析
3．9利用转基因证明ZmGFT1的功能
3．9．1转基因拟南芥叶酸分析
3．9．2转基因玉米叶酸结果分析
3．10三维建模分析
3．11共表达分析
3．12亚细胞定位
4讨论
4．2全基因关联分析发现显著影响5-F-THF含量的位点
4．3利用候选基因关联分析发现更多影响5-F-THF含量的位点
4．4连锁分析证明ZmGFT1与叶酸代谢关联
4．5GFT1基因功能讨论
4．5．1单倍型分析
4．5．2蛋白结构预测分析
4．5．3转基因植物分析
4．5．4ZmGFT1潜在功能分析
4．5．5 GFT1的进化和C3、C4植物的关系
参考文献
附录
致谢
