NK受体拮抗剂与5-HT受体拮抗剂抑制哮喘小鼠气道炎症的实验研究

摘要

目的: 研究NK1受体拮抗剂与5-HT3受体拮抗剂对小鼠哮喘气道炎症的抑制作用。 方法: (1)取30只雌性BALB/c小鼠，随机分为五组，其中A组为生理盐水对照组，B组为哮喘对照组，C组为5-HT3受体拮抗剂处理组，D组为NK1受体拮抗剂处理组，E组为联合处理组。0、7、14天OVA-氢氧化铝致敏佐剂腹腔注射分别致敏B、C、D、E组小鼠。于第16天开始给已致敏小鼠按前述分组注射相应药物，每三天追加给药一次。于第17天开始给予已致敏小鼠OVA-磷酸盐缓冲盐溶液(OVA-PBS)雾化吸入进行激发，持续7天。A组小鼠则以生理盐水进行致敏和激发。第24天断颈处死小鼠后颈部气管处行气管插管术，进行支气管肺泡灌洗并收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并离心、涂片、染色，光学显微镜下计数嗜酸性粒细胞所占的百分比。打开小鼠右侧胸腔，结扎右上肺两叶支气管根部，取右侧肺组织进行病理切片，HE染色，观察小鼠肺组织的炎症变化。 (2)取正常BALB/c小鼠骨髓细胞进行原代培养，细胞浓度为1.5×106/ml(4ml/孔，24孔板)，在培养的同时加入鼠源性IL-3刺激(10 ng/ml)，诱导其分化为肥大细胞。培养2周后取取体外培养所得的肥大细胞，随机分为五组。分别给予OVA、哮喘小鼠血清或P物质的不同组合处理。培养约8小时后RT－PCR检测NK1-R表达。 结果: (1)光学显微镜下计数可见哮喘对照组小鼠的支气管肺泡灌洗液涂片中有大量炎细胞存在，其中以嗜酸性粒细胞居多，约占细胞总数的(40.3±8.6)％，NK1受体拮抗剂处理组和5-HT3受体拮抗剂处理组小鼠支气管肺泡灌洗液涂片中嗜酸性粒细胞所占的百分比降低，分别降至约为(20.3±4.5)％和(15.8±5.3)％，联合组小鼠气管肺泡灌洗液中炎性细胞数量减少更明显，嗜酸性粒细胞所占的百分比降至(11.8±2.3)％。而组小鼠的支气管肺泡灌洗液中仅见少数气管上皮细胞，未见明显炎细胞。 (2)各组小鼠肺组织病理显示:A组小鼠肺部无炎症反应；B组小鼠存在弥漫性炎症反应，可见支气管管壁增厚，大量杯状细胞增生，管腔内有黏液分泌，周围有大量炎性细胞浸润。C组及D组炎症反应较B组为轻，支气管管壁轻微增厚，管腔内无黏液分泌，周围有少量炎性细胞浸润。E组仅见少量炎细胞浸润无粘液分泌及明显气道结构改变。 (3)气道厚度指标测定结果显示：与A组小鼠比较，B组小鼠气道壁内/外径比值明显减小，气道平滑肌层和网状基底膜层厚度明显增大。而与B组比较，C组、D组及E组比值均增大，气道厚度值则均减小。 (4)体外培养的肥大细胞在经过含Ig E的哮喘小鼠的血清和OVA共处理后表达NK1-R，添加P物质处理后肥大细胞上NK1-R表达上调。 结论: 应用NK1受体拮抗剂与5-HT3受体拮抗剂对哮喘小鼠气道炎症均可产生抑制作用，两者联合应用具有协同作用。其作用机制可能与肥大细胞有关。