隐丹参酮、丹参酮Ⅱ-A的抗炎症及抗癌症作用机制

摘要

丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)是我国传统中药中的重要一员。早在两千年前人们就将丹参用于祛瘀止痛，活血通经，清心除烦等方面。丹参的主要成分有丹参酮Ⅰ、ⅡA、ⅡB（tanshinoneⅠ、ⅡA、ⅡB）异丹参酮Ⅰ、ⅡA（isotanshinoneⅠ、ⅡA）、隐丹参酮（cryptotanshinone）、异隐丹参酮（isocryptotanshin-one）、甲基丹参酮（methyItanshinone）、羟基丹参酮。丹参及丹参酮类物质作为活血、保心、抗炎等药物在临床已经使用多年，但是对其抗炎症、癌症的作用靶点及机理还不清晰。我们在小鼠巨噬细胞系RAW264.7和人肝癌细胞系Hep G2中，通过使用半定量RT-PCR、Western Blot、ELISA、MTT 比色法等方法研究丹参抗炎症、癌症分子作用机理，发现其能够通过抑制磷脂酶A2酶活及转录，抑制Bcl-2蛋白，从而实现其抗炎症、癌症目的。 首先，使用隐丹参酮刺激经LPS处理的巨噬细胞RAW264.7细胞，通过半定量RT-PCR、Western Blot、HPLC等方法研究隐丹参酮对花生四烯酸代谢途径中关键酶—PLA2、COX-2。我们发现隐丹参酮在转录水平和酶活水平上均能有效地抑制cPLA2；COX-2在转录和翻译水平上却都没有受到隐丹参酮的抑制。 其次，在RAW264.7细胞中以同样的方法检测炎症相关因子—IL-6和IL-10的变化。结果显示，隐丹参酮在转录和翻译水平上能有效地抑制IL-6，同时也能有效地提高IL-10的含量。隐丹参酮对IL-6和IL-10的影响是专一性的，是在炎性的条件下的特异作用。 最后，在人肝癌细胞Hep G2细胞中研究了丹参酮Ⅱ-A的抗癌症机理。实验结果表明，丹参酮Ⅱ-A能通过抑制Bcl-2蛋白来激发Hep G2细胞的凋亡途径来达到抑制Hep G2的效果，其抑制作用与丹参酮Ⅱ-A浓度成正比。隐丹参酮的半抑制浓度：IC50＝94.6μM；半定量RT-PCR显示丹参酮Ⅱ-A能通过抑制凋亡相关基因——Bcl-2来实现抗肿瘤作用。