NPC乳鼠Purkinje细胞原代培养及Ca2+动力学特征和小鼠小脑氨基酸测定

摘要

本文主要从以下几个部分展开：
　　 第一部分NPC 乳鼠Purkinje 细胞原代培养及细胞Ca2+电流和Ca2+动力学2+特征
　　 目的：建立简单有效的NPC 乳鼠Purkinje 细胞原代培养方法，初步研究其细胞电生理特性，并将培养细胞用荧光染料Fluo-3/AM 标记后在共聚焦显微镜下测定细胞内Ca2+浓度,比较NP C。
　　 -/-乳鼠及野生型乳鼠培养细胞各观察指标之间的差异。
　　 方法：钝性分离生后24h 内的乳鼠小脑，采用低浓度胰蛋白酶加机械吹打法获得单细胞悬液，然后用含10％胎牛血清的DMEM/F12 培养,24h后更换为1％N2+1％T3+1％谷氨酰胺的DMEM/F12 维持培养,3-5d后进行细胞免疫荧光染色，5-7d后在共聚焦显微镜下测定Purkinje 细胞内基础荧光强度值以及加入KCL 溶液（60umol/l）以及NBQX(AMPA 受体阻滞剂)后荧光强度值的变化，利用相应软件处理后得出细胞内Ca2+浓度测定结果,7-9d后用全细胞膜片钳单通道法记录钙电流。结果：该方法培养的神经元形态典型，细胞学鉴定阳性率高(>70％)，并记录到钙通道电流，且NPC2+浓度高于野生型乳鼠。
　　 -/-乳鼠培养细胞Ca
　　 结论：该方法取材容易，操作简单，培养的Purkinje 细胞生长状态良好，活性较高，可用于电生理和Ca2+动力学研究。
　　 第二部分质谱分析法测定五周龄NPC小鼠小脑皮层3种氨基酸含量
　　 目的：测定五周龄NPC小鼠小脑皮层氨基酸含量，比较NPC-/-小鼠与野生型小鼠小脑内氨基酸含量的差异。
　　 方法：用微透析技术收集小鼠小脑皮层细胞外液中氨基酸，质谱分析法测定透析液中谷氨酸（Glu）、天门冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)的含量。
　　 结果：质谱分析法可快速准确测定小脑皮层中氨基酸的含量，但NPC
　　 -/-小鼠与野生型小鼠小脑内3种氨基酸含量无显著性差异。
　　 结论：五周龄NPC
　　 -/-与野生型小鼠相比,3种氨基酸含量无明显改变，氨基酸类神经递质可能不参与此期NPC
　　 -/-小鼠的病理改变。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

第一部分NPC 乳鼠Purkinje 细胞原代培养及细胞Ca2+电流和Ca2+动力学特征

第二部分质谱分析法测定五周龄NPC 小鼠小脑皮层3 种氨基酸含量

综 述:微透析技术在神经学科中的应用和发展

附录

致 谢