重组转化生长因子-β3基因对大鼠肝星状细胞肝维化相关蛋白内、外表达的影响

摘要

目的：肝纤维化是由于过多的细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）在肝内沉积所致。转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1能抑制肝细胞再生，促进肝星状细胞（Hepatic stellate cell,HSC）活化，使ECM合成增加，降解减少，在肝纤维化的发生、发展中具有重要的作用。临床研究发现在皮肤瘢痕的愈合过程中TGF-β3具有拮抗TGF-β1的作用,但TGF-β3与肝纤维化的关系尚未见报导，本研究旨在观察TGF-β3对大鼠HSC胶原合成和分泌的影响,探讨TGF-β3的抗肝纤维化作用。
　　
　　 方法：构建质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1。稳定转染:通过脂质体介导的方法,将pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染HSC-T6,经G418筛选建立稳定高表达pcDNA3.1(+)–TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆。再将pcDNA3.1(+)–TGF-β3 转染HSC-T6克隆细胞,用Western blot法和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测细胞内外TGF-β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶(MatriXmetalloproteinase,MMP)-2、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂(Tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-1的蛋白表达量。
　　
　　 结果：pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆后,与单纯阳性克隆组相比，TGF-β1、Ⅰ型胶原、TIMP-1细胞内蛋白表达及培养上清中的分泌水平均明显降低(P＜0.05)，MMP-2的表达也降低,但两者间差异无统计学意义(P>0.05)，而MMP-9的表达明显增高(P＜0.05)。
　　
　　 结论：重组质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3能减少肝星状细胞内外Ⅰ型胶原的合成及分泌，通过调节MMP-9及TIMP-1的表达,可抑制ECM的合成,促进其降解。

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材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

综述TGF-β与肝纤维化

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