人参皂苷Rb1预防大鼠肝窦阻塞综合征的作用及其信号转导机制的实验性研究

摘要

第一部分 人参皂苷Rb1 对大鼠肝窦阻塞综合征的影响
　　 目的：建立野百合碱(Mct)诱导大鼠肝窦阻塞综合征(SOS)的动物模型，探索人参皂苷Rb1（Rb1）对Mct 所致大鼠SOS的预防作用。
　　 方法：采用野百合碱（Mct）灌胃方法制备大鼠早期SOS模型。人参皂苷Rb1分别以15mg/kg和30mg/kg两种剂量通过尾静脉注射（iv）或腹腔注射（ip）预防性给药，分析实验结果，评价人参皂苷Rb1 对SOS的预防效果。本实验将40只SD大鼠随机分为8组，每组5只，分别为：正常对照组A；Mct模型组B；Rb1 15mg/kg iv预防组C；Rb1 15mg/kg ip预防组D；Rb1 30mg/kg iv预防组E；Rb1 30mg/kg ip预防组F；Rb1 30mg/kg iv单用组G；Rb1 30mg/kgip单用组H。实验第1天，C、D、E、F、G、H组大鼠按相应剂量给予人参皂苷Rb1，持续给药6天。在实验第3天，B、C、D、E、F组大鼠分别给予Mct 160mg/kg灌胃一次。实验第7天处死大鼠，吸取腹水，取肝脏称重，检测血清Tbil、ALT、AST 三项指标，肝脏组织病理切片HE染色并记录实验数据，处理方法采用多组间均数比较用方差分析，等级资料采取卡方检验，P<0.05为差异有意义。
　　 结果：1.与正常对照组比较，Mct模型组大鼠肝脏系数显著增加(P＜0.01)，由正常的3.71上升至5.57；生成腹水量均数达8.2ml；血清Tbil、ALT、AST上升显著（正常组均数Tbil：0.72 umol/l，ALT：32.2U/L，AST：136.6U/L；Mct模型组：Tbil：22.38umol/l，ALT：1015.4U/L，AST：653.4U/L；P值均<0.05）。Mct模型组5例大鼠肝脏病理切片均为重度肝窦阻塞综合征的表现：肝细胞损害严重，坏死广泛且严重，呈花斑状，小叶结构被破坏，中央静脉区坏死严重，中央静脉不易见，肝窦出血，汇管区及坏死区炎细胞浸润。2.Rb1 预防组与模型组、正常对照组的比较如下：（1）四个Rb1 预防组肝脏系数较Mct模型组降低约24％-34％，与正常组比较无明显差异（P>0.05）。（2）生成腹水量均数为0.28～1.4ml，比Mct模型组（8.2ml）明显降低，与正常组无明显差异（P>0.05）。（3）与Mct模型组相比，15mg/kg ip 预防组血清Tbil降低（P＜0.05），其余三个预防组降低不明显（P>0.05）。（4）四个预防组ALT 较Mct模型组均明显降低(P＜0.01)，与正常组无明显差异（P>0.05）。（5）15mg/kg iv预防组AST水平与模型组相比下降（P＜0.05），四个预防组AST与正常组相比无明显差异（P>0.05）。（6）四个预防组肝脏病理切片结果经卡方检验，15mg/kg iv预防组C和15mg/kg ip预防组D病理变化较模型组减轻（P＜0.05），与正常对照组相比仍有差距（P＜0.01）；30mg/kg iv预防组E和30mg/kg ip 预防组F 与模型组未见差异，与正常对照组差异明显（P<0.01）。3.采用主成分分析对SOS程度进行综合评分，综合得分越大，SOS病变程度越重。结果显示15mg/kg ip预防组D得分最少，SOS病变程度最轻，其次为15mg/kg iv预防组C、30mg/kg ip预防组F、30mg/kg iv预防组E。
　　 结论：1.模型组大鼠肝脏系数、腹水量、肝功能指标较正常组上升(P＜0.01)，提示肝脏受损，病理切片也符合重度SOS 病理表现，证明SOS 疾病模型构建成功。
　　 2.人参皂苷Rb1预防组大鼠平均肝脏系数、腹水、肝功能和病理表现较Mct模型组明显减轻，提示预先使用人参皂苷Rb1 可以明显地减轻早期SOS。
　　 3.低剂量Rb1（15mg/kg）预防组与高剂量Rb1（30mg/kg）预防组相比，前者SOS 病变减轻更为明显，提示低剂量Rb1 可能在大鼠SOS模型中发挥更好的预防作用。4.Rb1腹腔注射预防组和Rb1尾静脉注射组之间平均肝脏系数、腹水、肝功能和病理表现均无明显差异，但腹腔注射给药方法操作简单，是相对理想的给药方式。
　　 第二部分 人参皂苷Rb1 对大鼠肝窦阻塞综合征信号转导途径的影响
　　 目的：研究人参皂苷Rb1对内皮细胞保护剂内皮源性一氧化氮合酶（eNOS）的表达及一氧化氮（NO）合成的调控，并探索其对3-磷脂酰肌醇激酶（PI3K）信号转导通路的影响，为Rb1预防SOS作用提供理论及实验依据。
　　 方法：在第一部分实验分组设计基础上，取第一部分实验标本进一步检测，硝酸还原酶法检测血清NO含量；实时荧光定量PCR检测肝脏 eNOSmRNA的相对含量；Western Blot法检测各组蛋白激酶B/磷酸化丝氨酸激酶（AKT/P-AKT）的表达。
　　 结果：1.与正常组比较，Mct模型组NO均数下降了52％，（正常组28.89μmol/L，Mct模型组14μmol/L，P＜0.01）；eNOSmRNA表达量下降了40％（P＜0.05）。2.四个人参皂苷Rb1预防组血清NO均较Mct模型组上升(P＜0.05)，上升约8～12μmol/L；15mg/kg ip预防组可维持到与正常组无差异（P>0.05），但其余三个预防组与正常组相比仍存在差异（P＜0.05）3.四个人参皂苷Rb1预防组eNOSmRNA水平均较Mct模型组增高39％～66％(仅30mg/kg ip预防组F P>0.05，其余3组 P＜0.05)，各预防组eNOSmRNA表达水平与正常组无差异（P>0.05）。4．与正常组相比，Mct模型组肝脏表达P-AKT/AKT比值下降（P＜0.05）。5．与模型组相比，四个人参皂苷Rb1预防组P-AKT/AKT比值均有增高（P<0.05），与正常组相比，未见明显差异（P>0.05）。
　　 结论：1.大鼠SOS模型中血清NO合成降低、eNOSmRNA表达下调，证实了肝窦阻塞综合征的早期即存在肝窦内皮细胞的损伤。2.人参皂苷Rb1可以增强大鼠肝脏eNOS酶的表达、促进NO合成，发挥内皮细胞保护作用。3.大鼠SOS模型中PI3K/AKT信号途径受抑，人参皂苷Rb1可以减轻Mct对PI3K/AKT信号途径的抑制，PI3K/AKT信号途径活化与NO合成密切相关，人参皂苷Rb1可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进NO合成，保护肝窦内皮细胞，发挥预防SOS作用。因此为Rb1预防SOS提供了初步的理论和实验依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文对照

声明

前 言

第一部分 人参皂苷Rb1 对大鼠肝窦阻塞综合征的影响

第二部分 人参皂苷Rb1 对大鼠肝窦阻塞综合征信号转导途径的影响

综 述 造血干细胞移植治疗系统性红斑狼疮的研究进展

小结与展望

附录 硕士期间发表的论文及将要发表的论文

致 谢