造血干细胞移植患者骨髓单个核细胞幼红巨噬细胞黏附蛋白表达的探讨

摘要

目的：采用Taqman 探针技术，建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测幼红巨噬细胞黏附蛋白(EMP)mRNA的方法并对方法学进行评价。
　　 方法：用primer2.0 软件设计EMP 引物和Taqman 探针，优化反应体系，建立EMP mRNA的FQ-RT-PCR方法。用pGEM-Teasy 载体与普通PCR扩增所得的EMP cDNA片段进行连接，构建重组质粒作为标准品，并进行方法学评价。
　　 结果：本方法检测灵敏度为5拷贝/ml，线性范围为7~ 7×10 7 拷贝/ml，Ct值与拷贝数之间具有良好的线性关系。批内、批间变异系数分别为2.80~3.15％和3.45~4.50％。扩增产物测序分析显示扩增片段为EMP 特异性序列。
　　 结论：成功建立了FQ-RT-PCR检测EMP mRNA的方法，本方法具有敏感、特异、准确、重复性好等特点。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略名词表

声明

前 言

第一部分 FQ-RT-PCR 检测EMP mRNA 的方法学建立和评价

第二部分 HSCT 患者骨髓单个核细胞EMP 的表达

结 论及创 新 点、展 望

综述骨髓红系造血岛的研究进展

致 谢

附录