基因表达谱芯片技术筛选肾癌细胞OS-RC-2骨转移相关基因

摘要

目的：建立肾癌细胞OS-RC-2骨转移动物模型,获得病灶肿瘤细胞株,并对两组细胞间的基因表达谱进行对比分析,筛选差异表达基因。
　　方法：通过胫骨平台向胫骨髓腔内注射OS-RC-2细胞,待局部成瘤后取病灶肿瘤细胞,循环注射,最后获得的肿瘤细胞株与OS-RC-2细胞之间分别以MTT法检测增殖能力,Transwell法检测侵袭能力,流式细胞技术检测细胞周期变化。提取两组细胞的mRNA,通过基因芯片技术进行杂交扫描和分析,结合KEGG网站数据库的信号通路分析,筛选出相关基因,并以RT-PCR及Westernblot法分别验证筛选出的基因在mRNA及蛋白水平上的表达差异。
　　结果：建立肾癌骨转移动物模型,获得高骨转移能力细胞株OS-RC-2-BM-3,基因芯片扫描得到差异基因共1196个,其中上调基因926个,下调基因270个,根据KEGG数据库筛选出HIF-1α及HSP90,RT-PCR结果及Western结果均与基因芯片扫描符合。
　　结论：肾癌细胞OS-RC-2骨转移与多个基因相关,其中HIF-1α及HSP90可能起到关键作用。

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前言

1. 材料

1.1 实验动物:

1.2 主要试剂及细胞系

1.3 主要实验仪器

2 方法

2.1 试剂的配制

2.9g

5.8g

1.7ml

3.3ml

2.5ml

2.2 肾癌细胞OS-RC-2骨转移模型的建立

2.3 转移灶细胞的取材及纯化

2.4 细胞生长动力学测定（MTT法）

2.5 细胞侵袭能力测定（transwell法）

2.6 RT-PCR)检测 OS-RC-2 和 OS-RC-2-BM-3中mRNA 的表达

2.7 流式细胞术分析细胞周期:

2.8 Western blot分析蛋白表达情况

2.9 基因表达谱芯片检测

2.10 KEGG数据库分析

2.11 统计学分析

3 结 果

3.1 肾癌细胞OS-RC-2骨转移模型的建立

3.2 u-CT扫描

3.3 肾癌细胞亲骨株 OS-RC-2-BM-3的分离纯化

3.4 MTT法测定 OS-RC-2和OS-RC-2-BM-3生长能力

3.5 Transwell法检测OS-RC-2和OS-RC-2-BM-3侵袭能力

3.6 流式细胞术检测细胞周期

3.7 基因表达谱芯片技术检测差异表达的基因（图7a,7b）

3.8 KEGG数据分析

3.9 RT-PCR检测OS-RC-2组和OS-RC-2-BM-3组 mRNA的表达量

3.10 Western blot 法检测OS-RC-2组和OS-RC-2-BM-3组蛋白量

附图

4. 讨论

参考文献

综述

参考文献

缩略语索引

致谢