持续缺氧致慢性鼻-鼻窦炎小鼠HIF-1α、IL-17、VEGF、NF-KB因子表达的时序性及解剖部位差异性和机制研究

摘要

第一部分：持续低氧致慢性鼻-鼻窦炎小鼠模型的建立及机制研究
　　目的:建立持续低氧致慢性鼻-鼻窦炎小鼠模型。研究持续低氧引起的氧化应激反应能否作为独立因素导致慢性鼻-鼻窦炎以及低氧所致慢性鼻-鼻窦炎炎症程度的时序性变化。
　　方法:选取8周龄C57BL6小鼠为研究对象。将小鼠置于常压低氧仓饲养,氧气浓度控制在8-11％。在小鼠入仓后第0,2,4,6周取材观察鼻腔黏膜、骨质形态学变化。电镜观察鼻腔黏膜纤毛倒伏及细菌生物膜形成情况。按入仓后的时间点0,2,4,6周分别检测HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达变化。
　　结果:1、体式显微镜下大体观比较:与0周对照组相比,缺氧2周鼻腔及窦口黏膜轻度水肿,充血。缺氧4周鼻腔及窦口黏膜水肿明显,窦口被水肿黏膜阻塞。缺氧6周鼻腔及窦口黏膜充血肿胀明显。
　　2、HE染色:与0周对照组相比,缺氧2周鼻腔及窦口内可见炎症细胞浸润,缺氧4周鼻腔及窦口黏膜表面大量炎症细胞浸润,缺氧6周鼻腔及窦口黏膜表面内大量炎症细胞浸润,鼻腔内可见大量脓性分泌物内有炎症细胞聚集。
　　3、免疫组化:与0周对照组相比,HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB在免疫组化切片上的目的因子染色随时间加深,面积变广。
　　4、电镜:与0周对照组相比,缺氧2周鼻腔黏膜纤毛倒伏情况不明显,未见黏膜上有细菌生物膜结构出现。缺氧4周鼻腔黏膜纤毛倒伏,黏膜上可见细菌生物膜结构。缺氧6周鼻腔黏膜纤毛倒伏明显,部分脱落,黏膜上可见细菌生物膜结构。
　　5、Western-Blot分析:与0周对照组相比,缺氧2周时鼻腔黏膜组织中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平上调,有统计学差异(P<0.05)。缺氧4周时鼻腔黏膜组织中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平较缺氧2周时继续上调,有统计学差异华中科技大学博士学位论文(p<0.05)。缺氧6周时鼻腔黏膜组织中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平较缺氧4周时出现下调,有统计学差异(p<0.05),但缺氧6周时鼻腔黏膜组织中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平较0周对照组表达水平还是明显上调,有显著统计学差异(p<0.01)
　　6、RT-PCR分析:与0周对照组相比,缺氧2周时鼻腔黏膜组织中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平上调,有统计学差异(P<0.05)。缺氧4周时鼻腔黏膜组织中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平较缺氧2周时继续上调,有统计学差异(p<0.05)。缺氧6周时鼻腔黏膜组织中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平较缺氧4周时出现下调,有统计学差异(p<0.05),但缺氧6周时鼻腔黏膜组织中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平较0周对照组表达水平还是明显上调,有显著统计学差异(p<0.01)。表达水平动态变化的趋势与Western-Blot一致。
　　结论:
　　1、持续低氧引起的氧化应激反应在C57BL6小鼠可以作为独立因素导致慢性鼻-鼻窦炎。
　　2、持续低氧致慢性鼻-鼻窦炎炎症程度有时序性变化,炎症最早于缺氧后2周出现,缺氧4周时达到顶峰,在缺氧6周时下调,但仍明显高于0周对照组。表明缺氧4周之后鼻腔黏膜对缺氧刺激出现耐受,但炎症已不可逆转。
　　第二部分：慢性鼻-鼻窦炎形成过程中鼻腔不同解剖位置IL-17,NF-KB,VEGF因子表达时序性变化
　　目的:慢性低氧环境致小鼠慢性鼻-鼻窦炎过程中,检测鼻腔不同解剖位置黏膜炎症相关因子表达的动态变化,探讨炎症相关因子在鼻腔不同解剖位置表达的差异性
　　方法:选取8周龄C57BL6小鼠为研究对象,置于常压低氧舱内饲养,氧气浓度控制在8-11%。从4个解剖部位(SB鼻中隔、BN总鼻道黏膜、ZN中鼻甲黏膜、SN上颌窦黏膜)收取黏膜、骨质标本,按入仓后的时间点0,2,4,6周分部位分时间点检测HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达变化,同时行荧光双标染色。
　　结果:
　　1、RT-PCR分析:1)、同一时间点鼻腔不同解剖位置的黏膜中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平SB　　2、Western-Blot分析:与RT-PCR的趋势一致。1)、同一时间点鼻腔不同解剖位置的黏膜中HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平SB　　3、免疫荧光双染:HIF-1α与IL-17,VEGF,NF-KB共存于鼻腔黏膜细胞膜及骨膜表面,随持续缺氧刺激的时间变化,双标共存因子的染色变深,范围变广。
　　结论:
　　1、鼻腔不同解剖位置黏膜HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB的表达水平动态变化的趋势一致,即时序性变化相同。0-4周上调,4周后下调,6周的表达水平仍明显高于0周对照组。
　　2、HIF-1α,IL-17,VEGF,NF-KB在同一时间点不同解剖位置黏膜的表达有差异,这种差异在4个时间点的趋势没有变化,即不受时序性变化影响,仅与其来源的鼻腔不同解剖位置有关
　　3、免疫荧光双染可见HIF-1α与IL-17,VEGF,NF-KB共存于缺氧环境的4个时间点,说明该模型是由缺氧刺激引发氧化应激反应导致炎症形成。

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PART 1持续低氧致慢性鼻-鼻窦炎小鼠模型的建立及机制研究

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

PART 2慢性鼻-鼻窦炎形成过程中鼻腔不同解剖位置IL-17，NF-KB，VEGF，HIF-1α因子表达时序性变化

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

综述

附录

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