白血病细胞来源微泡水平传递BCR-ABL1融合基因及其蛋白恶性改造间充质干细胞

摘要

目的：肿瘤细胞与肿瘤微环境组分尤其是间充质干细胞(MSCs)存在丰富的信息交流,在肿瘤疾病进展中具有非常重要的作用。但是,肿瘤细胞与MSCs进行对话(cross-talk)的确切机制尚不清楚。本课题以K562白血病细胞为模型,研究白血病细胞来源微泡(MVs)对MSCs的影响及其分子机制,意在阐明肿瘤相关病理机制并为开发新的肿瘤治疗策略提供思路。
　　方法：应用新型全骨髓贴壁培养法分离培养人MSCs,通过细胞形态特征、表面标记和多向诱导分化等进行鉴定;差异离心法分离K562-MVs,应用激光共聚焦、透射电镜和流式细胞术观察其特征。RT-PCR及Western-blot证实K562-MVs和MSCs内BCR-ABL1mRNA及蛋白的表达。激光共聚焦显微镜观察K562-MVs与MSCs的融合过程。MTT和CCK8检测K562和MSCs增殖;RT-PCR及ELISA观察K562-MVs对MSCs分泌细胞因子的影响;采用RNase酶消化MV中的RNA组分,初步探讨MV改造MSCs的机制。
　　结果：采用新型全骨髓贴壁培养法成功分离培养人MSCs,经鉴定其符合MSCs表型,并具有多向分化能力。体外观察到K562细胞可分泌大小不一、直径约为0.1-1μm的球形MVs,并证实K562-MVs内表达BCR-ABL1mRNA及融合蛋白。激光共聚焦显微镜显示K562-MV能够通过直接融合方式进入MSCs,部分进入细胞核内。K562-MVs与MSCs的融合能够将BCR-ABL1mRNA及其蛋白水平传递至MSCs内,促进MSCs分泌TGF-β1、SCF和MMP-9等细胞因子。同时,K562-MVs改造的MSCs能够通过TGF-β1促进K562细胞增殖。
　　结论：K562-MVs通过水平传递BCR-ABL1融合基因及其蛋白改造MSCs,是白血病细胞与白血病微环境进行交叉对话的新型载体。阻断肿瘤细胞来源MV的释放或干扰MVs内容物的传递可能会成为阻止肿瘤疾病进展的一种新策略。

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英文缩略词表

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前言

材料和方法

一．细胞、培养基及主要试剂

二．实验方法

结果

1.MSCs的分离、培养及鉴定

2. K562-MV的提取及特征

3. K562-MV与MSC相互作用

4．K562-MV对MSCs的改造

讨论

参考文献

小结

综述

致谢