花生四烯酸CYP450表氧化酶代谢物EETs在病毒性暴发型肝炎中作用研究

摘要

背景及目的:重型肝炎发病率高,危害大,发病机制非常复杂,临床缺乏特异有效的治疗手段。经研究发现EETs具有抗炎、促进新生血管形成、调节离子通道、舒张血管以及促进肿瘤细胞的增殖、迁移等作用。EETs产生于花生四烯酸的第三条代谢途径,由CYP450表氧化酶的亚家族CYP2C和CYP2J的同工酶催化花生四烯酸生成具有较高生物活性的四种形式EETs:5,6-EETs、8,9-EETs、11,12-EETs和14,15-EETs。正常情况下生成的EETs在很短的时间内即被可溶性环氧化物水解酶(sEH)催化降解,产生DHET。通过抑制sEH(sEHI)可减慢EETs的降解速度,提高EETs的水平。目前关于EETs在病毒性暴发型肝炎中的研究在国内外未见报道。CYP450表氧化酶可催化多种物质的合成和代谢,亚家族以CYP2J和CYP2C家族为主,CYP2C9是CYP2C家族中的一员,主要分布在肝脏,约占肝微粒体CYP酶总量的20％,肝疾病对CYP2C9的影响比较明显。近十年来sEH抑制剂(sEHI)在活体和临床试验中的应用进步显著。研究表明注射sEHI可降低自发性高血压大鼠及血管紧张素介导的高血压大鼠的血压,并能减缓其肾脏的损害。近年来sEHI作为心血管疾病的新的治疗靶点已进入临床Ⅱ期试验。本研究通过建立MHV-3病毒诱导的小鼠病毒性暴发型肝炎动物模型,研究花生四烯酸CYP450表氧化酶代谢物EETs在病毒性暴发型肝炎中的作用及其可能机制,同时加用sEH抑制剂AUDA减慢EETs降解,升高体内内源性EETs水平,观察小鼠肝脏及血清内EETs有无升高,对小鼠生存率有无影响,可否作为病毒性暴发型肝炎抗炎治疗的新靶点。
　　方法:建立Balb/c小鼠经MHV-3病毒诱导的病毒性暴发型肝炎模型,用ELISA法检测不同时间点肝脏、血清内11,12-EETs、14,15-EETs含量变化;用免疫组化、westernblot等方法检测肝脏内EETs是否由花生四烯酸经CYP2C9产生;加用sEH抑制剂AUDA5mg/kg减慢EETs的降解速度,观察小鼠肝脏及血清内EETs有无增多,小鼠生存时间有无延长。
　　结果:1、在暴发型肝炎病程中,11,12-EETs、4,15-EETs增多,在72h时P<0.05,具有统计学意义。提示在MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎的病理进程中,肝脏EETs水平发生改变,可能参与了该病理过程。2、在MHV-3病毒诱导的小鼠暴发型肝炎肝组织切片中,免疫组化显示CYP2C9无表达;在MHV-3病毒诱导的小鼠暴发型肝炎肝组织提取的蛋白中,westernblot未见到阳性结果。证明肝组织内EETs并非由花生四烯酸经酶CYP2C9产生。3、加用sEH抑制剂AUDA后小鼠肝脏内11,12-EETs增多,但P>0.05,无统计学意义,且小鼠的生存时间无明显延长。
　　结论:
　　1.EETs参与了MHV-3诱导的小鼠病毒性暴发型肝炎的病理过程,但不能阻断暴发型肝炎的进展,不能提高病毒性暴发型肝炎小鼠的生存时间。
　　2.sEH抑制剂AUDA未能使小鼠暴肝模型肝脏11,12-EETs明显增多,小鼠生存率无改善;同时在该模型中,肝脏CYP2C9无表达,提示在该模型中,可能肝脏CYP2C9受损,导致上游EETs生成减少,未能发挥抗炎的保护作用。11,12-EETs、14,15-EETs增多,可能与其他类型的表氧化酶有关。

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前言

第一部分 EETs在病毒性暴发型肝炎发生发展过程中动态变化

材料与方法

1 实验材料

2.实验方法

结果

讨论

第二部分 研究EETs对病毒性暴发型肝炎肝细胞炎性损伤中的保护作用

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法：

结果

讨论

参考文献

综述

参考文献

致谢