柯里拉京对单纯疱疹病毒性脑炎发病过程中TLR2通路的干预作用机制研究

摘要

本文主要从以下几个方面展开论述:
　　第一部分 HSV-1感染小胶质细胞后对Toll样受体的影响
　　目的:研究HSV-1感染小胶质细胞后Toll样受体表达情况。
　　方法:小胶质细胞系BV2细胞接种HSV-1制造细胞模型，使用实时荧光定量聚合酶链反应检测HSV-1感染组与对照组TLR2、TLR3、TLR9mRNA表达。
　　结果:病毒感染后，TLR2、TLR3、TLR9mRNA均明显上升，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。
　　结论:TLR2、TLR3、TLR9参与了BV2小胶质细胞对HSV-1病毒的识别。
　　第二部分 HSV-1感染BV2细胞后对TLR2及下游通路信号分子的影响
　　目的:研究HSV-1感染小胶质细胞后对TLR2信号通路的影响。
　　方法:小胶质细胞系BV2接种HSV-1制造细胞模型，Malp2刺激BV2细胞作为阳性对照组，采用流式细胞术检测TLR2蛋白表达；Western blot检测TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应检测TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表达；ELISA检测IL-6、TNF-α的表达。
　　结果:1、BV2细胞被Malp2刺激后，TLR2及下游信号通路因子表达均明显升高，与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。2、HSV-1感染BV2细胞后，TLR2及下游信号通路因子表达明显升高，与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论:TLR2及下游信号通路因子介导了HSV-1感染BV2细胞的免疫炎性反应。
　　第三部分 柯里拉京对HSV-1感染后BV2细胞TLR2通路的调节作用
　　实验1柯里拉京对HSV-1感染正常BV2细胞TLR2通路的调节作用
　　目的:研究柯里拉京对HSV-1感染后BV2细胞TLR2通路的调节作用。
　　方法:小胶质细胞系BV2接种HSV-1制造细胞模型，Malp2刺激BV2细胞作为阳性对照组，细胞受HSV-1和Malp2干预后柯里拉京治疗24h，采用流式细胞术检测TLR2蛋白表达；Western blot检测 TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应检测 TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表达；ELISA检测IL-6、TNF-α的表达。
　　结果:1、柯里拉京治疗受Malp2刺激的BV2细胞后，TLR2及下游信号通路分子表达均下降，与生理盐水治疗组比较（P<0.05）。2、柯里拉京治疗受HSV-1感染的BV2细胞后，TLR2及下游信号通路分子表达均下降，与生理盐水治疗组比较差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论:柯里拉京可以抑制HSV-1感染BV2细胞后激活的TLR2信号通路。
　　实验2柯里拉京抑制HSV-1感染后BV2细胞TLR2通路机制研究
　　目的:研究柯里拉京抑制HSV-1感染后BV2细胞TLR2通路的机制。
　　方法:通过慢病毒载体使BV2细胞TLR2过表达，HSV-1感染BV2细胞后柯里拉京治疗24h；通过小分子RNA使BV2细胞TLR2表达沉默，HSV-1感染BV2细胞后柯里拉京治疗24h结果，采用Western blot、Real-time PCR和ELISA检测TLR2下游信号通路分子表达情况。
　　结果:1、TLR2过表达时，柯里拉京治疗受HSV-1感染的BV2细胞后，与生理盐水治疗组比较， TLR2下游信号通路分子表达均下降（P<0.05）。2、TLR2表达沉默时，柯里拉京治疗受HSV-1感染的BV2细胞后，与生理盐水治疗组比较：TIRAP变化不明显（P>0.05）；MyD88、TRAF6表达上升（P<0.05）；P38、NEMO、NF-к Bp65、IL-6、TNF-α表达下降（P<0.05）。
　　结论:柯里拉京对TIRAP、MyD88、TRAF6的抑制作用需要TLR2的参与，同时柯里拉京可能通过其他的Toll样受体或者直接对P38、NEMO、NF-к Bp65、IL-6、TNF-α产生抑制作用。
　　第四部分 柯里拉京对单纯疱疹病毒性脑炎小鼠TLR2通路的影响
　　目的:研究柯里拉京通过抑制TLR2通路治疗单纯疱疹病毒性脑炎的可行性。
　　方法:Balb/c小鼠颅内注射HSV-1制造小鼠单纯疱疹病毒性脑炎模型，随机分成：正常组、柯里拉京组、Malp2+盐水治疗组、Malp2+柯里拉京治疗组、HSV-1+盐水治疗感染组、HSV-1+柯里拉京治疗组。采用HE染色观察脑组织形态学；免疫组化检测TLR2表达；实时荧光定量聚合酶链反应检测TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表达；Western blot检测TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表达；ELISA检测IL-6、TNF-α的表达。
　　结果:1、柯里拉京干预组小鼠脑组织病理改变减轻2、 Malp2+盐水治疗组和HSV-1+盐水治疗感染组与正常组比较，TLR2及下游信号通路因子表达明显升高（P<0.05）。3、柯里拉京治疗受 Malp2刺激的小鼠后，与生理盐水治疗组比较，TLR2及下游信号通路分子表达均下降（P<0.05）。4、柯里拉京治疗受HSV-1感染的小鼠后，与生理盐水治疗组比较，TLR2及下游信号通路分子表达均下降（P<0.05）。
　　结论:柯里拉京可以通过抑制TLR2通路减轻HSV-1感染激发的脑损伤。

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前言

参考文献

第一部分 HSV-1感染小胶质细胞后对Toll样受体的影响

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分 HSV-1感染BV2细胞后TLR2及下游通路信号分子的变化

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

第三部分 柯里拉京对HSV-1感染后的BV2细胞TLR2通路的调节作用

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

第四部分 柯里拉京对单纯疱疹病毒性脑炎小鼠 TLR2 通路的影响

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

研 究 总 结

综述

参考文献

致谢