HMGB1通过下调E钙粘蛋白及p120连环蛋白的表达促进结肠癌细胞迁移

摘要

一、目的：
　　HMGB1可以通过多种途径促进肿瘤细胞迁移、侵袭及转移，虽然有研究证明E钙粘蛋白参与HMGB1介导的肿瘤进展，但粘附连接复合物的另一成员p120连环蛋白在其中是否发挥作用还鲜见报道。本实验主要研究HMGB1是否可以通过下调粘附连接蛋白 E钙粘蛋白及 p120连环蛋白的表达促进结肠癌细胞的迁移，从而为结肠癌的治疗提供新思路。
　　二、方法：
　　用重组人HMGB1刺激培养的人结肠癌细胞（LoVo），分别用细胞划痕实验、Transwell迁移实验及软琼脂粘附实验检测细胞的迁移及粘附能力；Western blot及RT-PCR检测HMGB1刺激24 h后，培养细胞内E-cad及p120表达量的变化；免疫荧光检测E-cad及p120在细胞中定位的变化；提前用Src抑制剂PP2处理细胞一小时，然后给予HMGB1刺激，观察PP2对HMGB1介导的细胞迁移及E-cad、p120表达的影响，从而间接证明HMGB1是否通过活化非受体型酪氨酸激酶Src发挥作用。
　　三、实验结果：
　　1.HMGB1对细胞迁移能力的影响
　　细胞划痕实验结果示：与对照组相比，HMGB1显著促进肿瘤细胞向划痕区域迁移。Transwell迁移实验示：HMGB1刺激组中穿过膜的细胞数明显多于对照组，差异具有统计学意义。
　　2.HMGB1对细胞间粘附的影响
　　对照组细胞易聚集形成较大细胞团，镜下单个细胞少见；而HMGB1刺激组细胞间连接松散，细胞多单个分散存在。软琼脂聚集实验结果显示两组差异具有统计学意义。
　　3.HMGB1对E-cad及p120表达的影响
　　1)给予人结肠癌细胞不同浓度的HMGB1（40、200、1000 ng/ml）刺激24 h，结果发现与对照组相比，实验组细胞内E-cad、p120蛋白表达减少，且呈浓度依赖性。
　　2)HMGB1刺激人结肠癌细胞不同时间（6h、12 h、24 h）后，与对照组（0 h）相比，培养细胞中 E-cad、p120蛋白表达减少，且呈时间依赖性。RT-PCR检测HMGB1处理细胞0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后p120mRNA水平，结果示：HMGB1刺激不同时间，细胞中p120 mRNA表达无明显变化。
　　3)免疫荧光示：在对照组LoVo细胞中，E-cad、p120共定位在细胞间连接处，呈完整连续的线状；HMGB1刺激后E-cad、p120在细胞膜上表达缺失，表现为胞浆弱荧光强度。
　　4.Src抑制剂PP2对细胞迁移及E-cad、p120表达的影响PP2（20μM）预处理细胞1 h，可以抑制细胞迁移，并恢复E-cad、p120蛋白的表达及其在细胞连接处的定位。
　　四、实验结论：
　　HMGB1可能通过活化Src下调人结肠癌细胞E-cad及p120的表达，降低肿瘤细胞间的粘附，从而促进肿瘤细胞的迁移。

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中文摘要

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主要缩略词表

前言

材料和方法

材料

方法

实 验 结 果

一、HMGB1促进LoVo细胞迁移

二、HMGB1抑制肿瘤细胞间的粘附

三、HMGB1刺激可引起LoVo细胞内p120及E-cad表达下调

四、HMGB1通过Src家族酪氨酸激酶诱导p120及E-cad表达下调

讨论

结论

参考文献

综述: 高迁移率族蛋白B1在肿瘤中的作用

致谢