巨噬细胞与肠胶质细胞间的信号传递及其机制研究

摘要

目的：了解巨噬细胞与肠胶质细胞间的信号传递过程，并探讨信号传递过程中相关的信号分子及可能机制。
　　方法：1.收集体外培养的 RAW264.7巨噬细胞(RAW)的条件培养基(RAW conditioned media，RAW-CM），用其干预CRL-2690肠胶质细胞（EGC），以RT-PCR检测干预前后肠胶质细胞S100B mRNA的表达，Western Blotting检测S100B蛋白质的合成；2.分别以不同浓度（1-100ng/ml）的重组S100B干预体外培养的RAW264.7巨噬细胞系，以RT-PCR检测M1型巨噬细胞分泌的标志分子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达及M2型巨噬细胞分泌的标志分子精氨酸酶(Arg)、白细胞介素10(IL-10) mRNA的表达；再以 Western Blotting检测 TNF-α蛋白质的合成及以酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）检测培养巨噬细胞上清液中TNF-α的分泌及释放；3.分别以不同浓度(0.1-10ng/ml)的重组 TNF-α干预CRL-2690肠胶质细胞系，以RT-PCR检测S100B mRNA的表达，Western Blotting检测S100B蛋白质的合成；4.收集体外培养的CRL-2690肠胶质细胞的条件培养基（EGC conditioned media，EGC-CM）干预RAW264.7巨噬细胞，以RT-PCR检测干预前后巨噬细胞TNF-αmRNA的表达，Western Blotting检测TNF-α蛋白质的合成及以ELISA检测培养巨噬细胞上清液中TNF-α的分泌及释放。
　　结果：1.巨噬细胞条件培养基（RAW-CM)刺激肠胶质细胞后，抑制S100B mRNA表达，促进S100B蛋白质的合成；2.重组S100B促进巨噬细胞TNF-α mRNA表达及蛋白的合成与分泌，同样刺激巨噬细胞一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达，提示S100B干预后可促使巨噬细胞向M1型极化；但不影响M2型巨噬细胞分泌的标志分子精氨酸酶(Arg)、白细胞介素10(IL-10) mRNA的表达；3.重组TNF-α抑制肠胶质细胞S100B mRNA的表达，但促进S100B蛋白质的合成；4.肠胶质细胞条件培养基（EGC-CM）刺激 RAW巨噬细胞后，促进巨噬细胞TNF-αmRNA表达及蛋白质的合成与释放。
　　结论：在炎症反应过程中，巨噬细胞与肠胶质细胞通过TNF-α与S100B进行信号传递，从而可能实现对肠神经元及胃肠动力的调节。

目录

英文缩略词

前言

材料和方法

1．实验材料

1.1 细胞系

1.2 主要仪器

1.3 主要试剂

2.实验方法

2.1 细胞培养

2.2 细胞计数

2.3 试剂配制及保存

2.4 重组S100B作用于Raw细胞

2.5 重组TNF-α作用于CRL-2690细胞

2.6 条件培养基（conditioned medium，CM）的收集

2.7 ELISA检测TNF-α蛋白质水平

2.8 RT-PCR检测mRNA表达

2.9 Western blot检测肠胶质细胞S100B及巨噬细胞TNF-α的蛋白表达

2.10 统计分析

结果

1. Raw条件培养基（RAW-CM）对肠胶质细胞S100B的影响

2. 肠胶质细胞条件培养基（EGC-CM）对RAW264.7细胞TNF-α的影响

3. S100B对Raw264.7细胞mRNA表达的影响

4. S100B对Raw264.7细胞TNF-α蛋白表达及释放的影响

5. TNF-α对CRL-2690细胞S100B mRNA及蛋白质表达的影响

讨论

参考文献

综述:肠神经胶质细胞对肠上皮屏障及肠道炎症的影响

致谢